[發明專利]一種具有天然活性的重組人胱抑素C蛋白及其制備方法

有效

• 申請號: 201110301785.2
• 申請日: 2011-09-27
• 公開（公告）號: CN103014047A
• 公開（公告）日: 2013-04-03
• 發明（設計）人: 崔鵬;李泓彥;何志強;胡鵬;楊耿周;范凌云
• 申請（專利權）人: 深圳市菲鵬生物股份有限公司
• 主分類號: C12N15/70
• 分類號: C12N15/70;C07K14/81;C07K16/38;G01N33/68;C12R1/19
• 代理公司: 深圳鼎合誠知識產權代理有限公司 44281
• 代理人: 羅瑤

1.一種人胱抑素C蛋白的制備方法，其特征在于，所述方法包括將人胱抑素C核酸序列與表達載體重組后轉化表達宿主細胞，培養宿主細胞后收集純化重組表達的人胱抑素C蛋白，再將得到的重組人胱抑素C蛋白進行蛋白酶酶切處理。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述蛋白酶選自胰蛋白酶、纖溶酶、凝血酶、內肽酶Lys-C、Xa因子、內肽酶Arg-C中的任一種；所述蛋白酶包括天然提取及其基因工程重組蛋白。

3.根據權利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，所述蛋白酶酶切中重組人胱抑素C蛋白與蛋白酶的質量比為50∶1～1000∶1。

4.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述蛋白酶酶切于30～37℃切割5-30分鐘，或3～5℃條件下切割20-28小時。

5.根據權利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，所述重組表達的人胱抑素C蛋白具有SEQ?ID?NO：2所示氨基酸序列。

6.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述重組表達的人胱抑素C蛋白的核酸序列如SEQ?ID?NO：1所示。

7.根據權利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，表達載體為原核表達載體，且該原核表達載體的融合蛋白標簽可利用金屬螯合原理親和純化人胱抑素C蛋白，所述原核表達載體進一步優選為PET-15b。

8.根據權利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，所述表達宿主細胞為能夠表達所述重組表達質粒的宿主細胞，且具有可幫助表達蛋白二硫鍵形成和增加可溶性的特征，所述表達宿主細胞進一步優選大腸桿菌Origami?B(DE3)。

9.根據權利要求1-8中任一項所述的制備方法制備得到的重組人胱抑素C蛋白。

10.根據權利要求9所得到的重組人胱抑素C蛋白在制備單克隆抗體、多抗血清或標準品方面的應用。