[發明專利]漢賽巴爾通體的PCR鑒定方法

有效

• 申請號: 201110301042.5
• 申請日: 2011-09-28
• 公開（公告）號: CN102312006A
• 公開（公告）日: 2012-01-11
• 發明（設計）人: 栗冬梅;劉起勇;張建中
• 申請（專利權）人: 中國疾病預防控制中心傳染病預防控制所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王朋飛;張慶敏

1.一種漢賽巴爾通體的PCR鑒定方法，其特征在于，根據漢賽巴爾通體外膜蛋白基因BH13010的序列高變區設計特異性引物，以待測樣品DNA或細菌培養物為模板進行特異性擴增，若能擴增到特異性條帶，即鑒定為漢賽巴爾通體。

2.根據權利要求1所述的鑒定方法，其特征在于，其中PCR引物序列為：

Cpf：GTGACAGCTTATGGCGGTTT，

Cpr：CGTCCATTGACCAATTTCC。

3.一種漢賽巴爾通體的多重PCR鑒定方法，其特征在于，以待測樣品DNA或細菌培養物為模板，特異性地擴增漢賽巴爾通體的dnaG基因、膜整合蛋白基因BH11550、外膜蛋白基因BH13010和lxpD基因，擴增到目的條帶即為漢賽巴爾通體，其中，外膜蛋白基因BH13010的引物是根據漢賽巴爾通體外膜蛋白基因BH13010的序列高變區設計的。

4.如權利要求3所述的鑒定方法，其特征在于，其中，PCR引物分別為：

BhAF：CACGCGCATCAAGATAACGAC，

BhAR：TTCAATCCAATCGCCGACA；

Cpf：GTGACAGCTTATGGCGGTTT，

Cpr：CGTCCATTGACCAATTTCC；和

6f1：ACAGCAGTAGTATGCAAtAA，

6f2：ACGTCCACACCACAGCG。

5.如權利要求4所述的鑒定方法，其特征在于，其中PCR反應液中，引物BhAF、BhAR、Cpf和Cpr的濃度分別為0.2μM，引物6f1和6f2的濃度為0.3μM。

6.如權利要求4所述的鑒定方法，其特征在于，其中多重PCR反應條件為94℃變性30s，54～58℃退火30s，72℃延伸1min，擴增25個循環。

7.漢賽巴爾通體PCR鑒定用引物，其為：

Cpf：GTGACAGCTTATGGCGGTTT，

Cpr：CGTCCATTGACCAATTTCC。

8.漢賽巴爾通體多重PCR鑒定用引物，其為：

BhAF：CACGCGCATCAAGATAACGAC，

BhAR：TTCAATCCAATCGCCGACA；

Cpf：GTGACAGCTTATGGCGGTTT，

Cpr：CGTCCATTGACCAATTTCC；和

6f1：ACAGCAGTAGTATGCAAtAA，

6f2：ACGTCCACACCACAGCG。

9.含有權利要求7或8所述引物的漢賽巴爾通體多重PCR鑒定試劑盒。

10.權利要求7或8所述的引物在制備用于鑒定漢賽巴爾通體的試劑中的應用。