[發明專利]一種賴氨酸芽孢桿菌（Lysinibacillus sp.）GY32及其應用

有效

• 申請號: 201110300903.8
• 申請日: 2011-10-08
• 公開（公告）號: CN102363756A
• 公開（公告）日: 2012-02-29
• 發明（設計）人: 陳杏娟;朱春節;許玫英;孫國萍;郭俊
• 申請（專利權）人: 廣東省微生物研究所;佛山市環保技術與裝備研發專業中心
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A62D3/02;C12R1/01;A62D101/28
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 劉明星;余炳和

技術領域：

本發明屬于微生物技術領域，具體涉及一種賴氨酸芽孢桿菌(Lysinibacillus?sp.)GY32 及其在降解十溴聯苯醚中的應用。

背景技術：

多溴聯苯醚(polybrominated?diphenyl?ethers，PBDEs)是一種持久性有機污染物，因具 有優良的阻燃性能而被廣泛應用于電子電器產品中。近年來隨著電子電器行業的迅猛發展， 大量電子垃圾的無序拆解，具有生態生理毒性和生物積蓄毒性的PBDEs釋放到水體土壤環境 中，對生態環境和生物體健康都造成了嚴重的影響和危害。面對多溴聯苯醚污染造成的生態 環境問題，人們積極探索各種解決方法。合適的微生物處理法可以實現污染物的徹底無毒化， 是較為理想的污染物處理途徑。具有多溴聯苯醚降解功能的微生物的獲得無疑給這些污染問 題的解決帶來了曙光。

Lysinibacillus屬是2007年從Bacillus屬分離出來的新屬，僅有三個分類種。該屬的菌種 革蘭氏染色陽性，能形成橢圓或圓形芽孢。氧化酶和過氧化氫酶試驗陽性，硝酸鹽還原、產 H₂S和吲哚試驗陰性。主要脂肪酸類型為iso-C_15:0，主要醌型為MK-7，細胞壁肽聚糖含Lys 和Asp，DNA中(G+C)mol％為35-38％。

發明內容：

本發明的第一個目的是提供一種賴氨酸芽孢桿菌(Lysinibacillus?sp.)GY32，該菌于2011 年9月7日保存于中國典型培養物保藏中心(CCTCC)，地址：中國武漢市武漢大學，保藏編 號為CCTCC?NO：M?2011307。

本發明的賴氨酸芽孢桿菌(Lysinibacillus?sp.)GY32是通過對廣東汕頭某電子垃圾集中 處理區的河床底泥進行富集培養、分離、純化，得到Lysinibacillus屬的一個新種。

賴氨酸芽孢桿菌(Lysinibacillus?sp.)GY32的形態學和生理生化特征：

該菌24h平板培養物菌落圓形、乳黃色，突出培養基，不透明，邊緣有一圈半透明刺突 狀，直徑2-3mm，放大12倍觀察菌落呈半圓結晶狀。菌體革蘭氏陽性，能形成橢圓或圓形芽 孢，周生鞭毛。對數生長期及穩定期前期會呈現出寬0.8-1.34μm、長大于29.87μm長線狀或 大于5μm的長桿狀菌體形態，至今尚未發現其他多溴聯苯醚降解微生物具有如此特殊的形態 特征，24h后與普通桿狀細胞無明顯差異。氧化酶和過氧化氫酶陽性，V-P試驗陰性。該菌能 在好氧和兼性厭氧條件下生長，生長pH6.0～9.0，生長溫度15～45℃。

賴氨酸芽孢桿菌(Lysinibacillus?sp.)GY32的分子分類學地位：

按照常規方法提取賴氨酸芽孢桿菌(Lysinibacillus?sp.)GY32的總DNA。采用16S?rRNA 通用引物27F和1492R擴增其16S?rRNA基因，將PCR產物直接測序，獲得16S?rRNA基因 序列，其序列如SEQ?ID?NO.1所示。將該序列與NCBI的GenBank中序列進行比對，進行 BLAST分析，結果發現賴氨酸芽孢桿菌(Lysinibacillus?sp.)GY32的16S?rRNA基因序列與 Lysinibacillus屬的已有模式菌株具有較高的相似性，其中與Lysinibacillus?sphaericus的序列相 似性為98％。再擴增其gyrB基因，將PCR產物直接測序，獲得gyrB基因序列，其序列如 SEQ?ID?NO.2所示，經BLAST分析，與其相似性最大的已公開發表序列為Lysinibacillus sphaericus?C3-41，但相似度僅為81％，文獻資料顯示同一菌種的gyrB基因序列的同源性應 大于95％。

綜合上述形態學、生理生化特征和分子分類學結果，認為賴氨酸芽孢桿菌(Lysinibacillus sp.)GY32屬于Lysinibacillus屬的一個新種，定名為賴氨酸芽孢桿菌(Lysinibacillus?sp.)GY32， 于2011年9月7日保存于中國典型培養物保藏中心(CCTCC)，地址：中國武漢市武漢大學， 保藏編號為CCTCC?NO：M?2011307。