[發明專利]抗人磷酸二酯酶4D相互作用蛋白變體5的單克隆抗體及其應用

有效

• 申請號: 201110297243.2
• 申請日: 2011-09-29
• 公開（公告）號: CN102584995A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: 張霖;牛瑞芳;羅藝;楊毅;魏熙胤;齊眾
• 申請（專利權）人: 天津市腫瘤醫院
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C12N5/20;G01N33/577;C12R1/91
• 代理公司: 天津市宗欣專利商標代理有限公司 12103
• 代理人: 董光仁

技術領域

本發明涉及含有抗體的醫藥配制品，或單克隆抗體的制備，具體是一種抗人磷酸二酯酶4D相互作用蛋白變體5的單克隆抗體及其應用。?

背景技術

Myomegalin（MMG/MMGL/PDE4DIP,?phosphodiesterase?4D?interacting?protein,?磷酸二酯酶4D相互作用蛋白）是一種嶄新的蛋白，它分布于胞漿中，并在高爾基體和中心體處聚集，提示該分子的主要功能涉及這兩個細胞器的cAMP信號轉導。Myomegalin基因很長，約15萬堿基對，但是其每個外顯子都很小，大約只有30-40氨基酸，因此Myomegalin的變體很多。目前尚不清楚具體有多少個Myomegalin的變體存在。?

Myomegalin蛋白結構中含有α螺旋和coiled-coil結構，以及微管相關蛋白結合域和亮氨酸拉鏈模式。Myomegalin還被稱作PDE4DIP，這是由于該蛋白可以結合循環中的PDE4D（核苷酸磷酸二酯酶）。在腫瘤性疾病中能夠見到Myomegalin的異常表現。骨髓增生異常的病人中可以檢測出PDE4DIP-PDGFRB融合基因。在食管腫瘤中可以見到Myomegalin變體5蛋白的高表達。變體1蛋白則在大多數的腫瘤細胞中缺失。由此可見，Myomegalin變體與腫瘤的關系尚未完全闡明，值得進一步研究。?

1975年，Kohler和Milstein發現將小鼠骨髓瘤細胞和綿羊紅細胞免疫的小鼠脾細胞進行融合，形成的雜交細胞既可產生抗體，又可無限增殖，從而創立了單克隆抗體雜交瘤技術。這一技術上的突破不僅為醫學與生物學基礎研究開創了新紀元，也為臨床疾病的診斷、預防、治療提供了新的工具。單克隆抗體是研究蛋白質表達和分布的主要工具之一，針對Myomegalin的單克隆抗體可以檢測細胞和組織，尤其是腫瘤組織中Myomegalin的表達水平和定位情況，有助于深入研究Myomegalin的細胞學功能及在腫瘤中的生物學作用。?

發明內容

本發明是為了解決Myomegalin在細胞生物功能中的作用，以及Myomegalin與腫瘤之間的關系，應用于基礎醫學研究和臨床檢測問題，而提供一種抗人磷酸二酯酶4D相互作用蛋白變體5蛋白的單克隆抗體及其應用。?

本發明是按以下技術方案實現的。?

一種抗人磷酸二酯酶4D相互作用蛋白變體5蛋白的單克隆抗體，特點是該抗體特異性識別人磷酸二酯酶4D相互作用蛋白變體5蛋白1103-1116位點氨基酸；該抗體由保藏號為CGMCC?No.5078的雜交瘤細胞株產生，氨基酸序列為序列表所示的氨基酸序列。?

一種雜交瘤細胞，該雜交瘤細胞株產生抗人磷酸二酯酶4D相互作用蛋白變體5蛋白單克隆抗體，該雜交瘤細胞株保藏號為:CGMCC?No.5078。?

所述抗人磷酸二酯酶4D相互作用蛋白變體5蛋白的單克隆抗體在制備免疫組化檢測試劑中的應用，用來檢測人體組織及細胞中磷酸二酯酶4D相互作用蛋白變體5的表達與定位。?

以此原核表達多肽免疫BALB/c小鼠，取小鼠脾臟與小鼠骨髓瘤細胞（SP2/0）細胞融合，用上述原核表達多肽進行篩選，獲得陽性克隆，亞型鑒定及小鼠腹腔注射制備腹水，腹水抗體進行細胞和組織的免疫組化，觀察Myomegalin變體5蛋白的表達和定位檢測。?

這樣設計的本發明，其抗體與Myomegalin變體5蛋白具有特異性結合能力，制備人Myomegalin變體5蛋白的免疫組化檢測試劑，用來檢測人體組織特別是腫瘤組織細胞中Myomegalin變體5的表達與定位。?

雜交瘤細胞株由中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏；?

地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所。?

保藏號為：CGMCC?No.5078，保藏日期：2011年7月22日。?

附圖說明

圖1是Hela細胞的Myomegalin變體5蛋白免疫熒光染色圖；?

圖2顯示Myomegalin變體5蛋白在乳腺導管內癌中的表達與定位；?

圖3顯示Myomegalin變體5蛋白在正常乳腺中的表達。?

具體實施方式

下面結合附圖及實施例對本發明做詳細的說明。?

一、Myomegalin變體5（磷酸二酯酶4D相互作用蛋白變體5）的單克隆抗體的制備?

1.實驗材料來源