[發(fā)明專利]一種微生物菌粉的生產方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110297084.6
• 申請日: 2011-09-28
• 公開（公告）號: CN102352329A
• 公開（公告）日: 2012-02-15
• 發(fā)明（設計）人: 江蘇華;尚玉新
• 申請（專利權）人: 重慶泰平藥業(yè)有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/145
• 代理公司: 重慶博凱知識產權代理有限公司 50212
• 代理人: 李曉兵

技術領域

本發(fā)明涉及一種微生物培養(yǎng)方法，尤其是一種適用于芽孢桿菌的發(fā)酵培養(yǎng)和菌泥干燥的處理方法。

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背景技術

?在微生物領域，常常涉及到菌種的培養(yǎng)、增殖，使菌株在一定的溫度條件下、在適宜的培養(yǎng)基中增殖以擴大數量，滿足該菌種在人用藥、獸用藥、飼料、養(yǎng)殖等領域的使用需要。尤其是對于芽孢桿菌，如枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、蠟樣芽孢桿菌、酪酸梭菌等，都需要在發(fā)酵罐內進行發(fā)酵、增殖，使活菌數量顯著增加。

根據微生物生命周期理論，微生物生長過程可分為：適應期、對數生長期、平衡期、死亡期。平衡期后的微生物因生長過程中底物濃度的降低、代謝產物的抑制、pH值的變化等生長環(huán)境的惡化及自身遺傳特性的影響導致微生物生長繁殖受到抑制，活菌數量開始減少，最終大量死亡。

?目前，國內芽孢桿菌（如，酪酸梭菌）發(fā)酵主要采用傳統(tǒng)的分批低密度法發(fā)酵，該方法具有發(fā)酵液菌濃度低、菌粉活菌數不高，發(fā)酵系數低，產量低，能耗高，成本高等缺點。

在發(fā)酵罐內進行發(fā)酵后，一般都需要對發(fā)酵液采用離心分離或其他方式分離，獲得含菌量高的濕菌泥。由于活菌體在進一步的加工及包裝、運輸、存儲等過程中，其水分含量須滿足加工工藝及使用要求，故需要對含水量高的濕菌泥進行干燥，除去其中多余的水分。現有技術中，對菌泥通常采用冷凍干燥法進行干燥，該法工藝為：凍結→升華干燥→解析干燥等過程，該法中對活菌凍干過程控制及凍干工藝的設計十分考究，嚴重影響活菌的數量，對其損傷較大；而且，冷凍干燥機采用的制冷劑主要是氟里昂，凍干機使用過程中必需損耗部分氟里昂，長期使用會使大氣中產生溫室效應，對環(huán)境有一定的破壞作用；另外，由于冷凍干燥過程時間長，耗電、耗油較高，能源消耗較大，相應增大了生產成本。

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發(fā)明內容

本發(fā)明針對現有技術中微生物發(fā)酵主要采用傳統(tǒng)的分批低密度法發(fā)酵方法、對發(fā)酵液離心分離得到的菌泥采用冷凍干燥，存在的發(fā)酵液菌濃度低、菌粉活菌數不高，發(fā)酵系數低，產量低，能耗高，成本高等不足，提供一種微生物菌粉的生產方法；該方法能大幅度提高芽孢桿菌（如酪酸梭菌）發(fā)酵液活菌數、大幅度提高發(fā)酵系數和產品質量，大幅縮短生產周期，大大降低能耗和生產成本，而且能降低對環(huán)境的破壞。

本發(fā)明的技術方案：一種微生物菌粉的生產方法，其特征在于包含如下工藝步驟：

（1）選擇合適的芽孢桿菌生產種子，采用常規(guī)的分離純化處理，使菌種活化；

????（2）一級種子培養(yǎng)：將活化后的芽孢桿菌菌種接種至一級種子液體培養(yǎng)基中，30-40℃培養(yǎng)6-24小時；

????（3）一級種子液熱處理：對步驟（2）所得的一級種子液進行熱處理：處理溫度60—90℃，時間5—60分鐘；

（4）二級種子培養(yǎng)：將熱處理后的一級種子接入二級種子液體培養(yǎng)基中，30-40℃培養(yǎng)6-24小時；

????（5）二級種子液熱處理：對步驟（4）所得的二級種子液進行熱處理：處理溫度60—90℃，時間5—60分鐘；

（6）三級種子培養(yǎng)：將熱處理后的二級種子接入三級種子液體培養(yǎng)基中，30-40℃培養(yǎng)6-24小時；

????（7）三級種子液熱處理：對步驟（6）所得的三級種子液進行熱處理：處理溫度60—90℃，時間5—60分鐘；

（8）三級種子液冷處理：對步驟（7）中熱處理后的三級種子進行冷處理：處理溫度2—25℃，時間6—48小時；

????（9）發(fā)酵培養(yǎng)：將步驟（8）中進行了冷處理的三級種子接入液體培養(yǎng)基中，在發(fā)酵罐內培養(yǎng)16-36小時，使其活菌數及芽孢數量倍增；并根據動態(tài)檢測發(fā)酵培養(yǎng)過程中的實時數據，實時向發(fā)酵罐內補充液體培養(yǎng)基和/或堿，發(fā)酵培養(yǎng)過程中的實時數據主要包括溫度、CO2濃度、pH值、殘?zhí)恰⒕鷿舛取⑷苎醯龋患尤氲膲A為氫氧化鈉、碳酸鈉、碳酸氫鈉、氨水中的一種，或兩種以上的混合物。

????（10）對步驟（9）中發(fā)酵液進行分離后得到的菌泥內，加入吸附劑，混合均勻；

所述的吸附劑，為淀粉、預膠化淀粉、面粉、玉米粉、脫脂奶粉、沸石粉、糖粉、乳糖中的一種，或其中兩種或兩種以上，以各自重量百分比大于0%的比例混合，

菌泥與吸附劑的重量比例，菌泥：吸附劑為1：（8~100）；

（11）將加入了吸附劑的菌泥邊粉碎、邊過篩，將菌體與吸附劑分離。