[發(fā)明專利]抑制丙型肝炎病毒侵染細(xì)胞的多肽及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110293736.9
• 申請日: 2011-09-27
• 公開（公告）號: CN102382171A
• 公開（公告）日: 2012-03-21
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 呂欣;尹文;張芳琳;李玉成;姚敏;賈戰(zhàn)生;黃小軍;張建敏;雷迎峰;楊敬;蘭海云
• 申請（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;A61K38/08;A61P1/16;A61P31/14
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責(zé)任公司 61200
• 代理人: 陸萬壽

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于預(yù)防HCV感染的技術(shù)領(lǐng)域，涉及抑制丙型肝炎病毒侵染細(xì)胞的多肽及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

HCV(丙型肝炎病毒)為黃病毒屬，單股正鏈RNA病毒，由結(jié)構(gòu)蛋白(Core、E1、E2)和非結(jié)構(gòu)蛋白(NS2～NS5B)組成。HCV是丙型肝炎的病原體，急性感染后約75％發(fā)展為慢性肝炎，其中約20％結(jié)局為肝硬化或肝功能衰竭，并有可能進(jìn)一步發(fā)展為肝癌。目前全世界有1.7億感染者，我國約有4000萬，HCV感染已經(jīng)成為全球性的社會公共衛(wèi)生問題之一。

HCV因病毒自身的高變異性，給疫苗研究造成極大困難。現(xiàn)今對HCV感染的治療僅限于單獨使用干擾素(interferon，IFN)，或者與廣譜抗病毒藥物利巴韋林(ribavirin)聯(lián)合用藥，但治療效果不佳，有一定的副作用，且不同型別對IFN反應(yīng)性差別較大。多年來研究者一直在尋找防治感染的有效靶點，但還未得到特異有效的抑制劑，使用效果仍在實驗或臨床研究初步評估階段。

根據(jù)病毒與細(xì)胞相互作用的理論，病毒與宿主細(xì)胞膜表面受體的特異性結(jié)合是病毒感染的始動環(huán)節(jié)，型別不同的同種病毒在與細(xì)胞結(jié)合過程中作用分子一般是固定的，阻斷二者之間的結(jié)合，即可有效地抑制病毒性感染的發(fā)生。2003年美國FDA批準(zhǔn)抗人免疫缺陷病毒(HIV)的新藥T-20(又名Enfuvirtide或)上市，T-20是穿入抑制劑中第一個上市的藥物，含有36Aa，能夠與HIV包膜糖蛋白gp41結(jié)合，阻止病毒與靶細(xì)胞的融合，臨床試驗證明效果較好，受試者副反應(yīng)較小(Cervia?JS，et?al.Enfuvirtide(T-20)：a?novel?human?immunodeficiency?virus?type?1fusion?inhibitor.Clin?Infect?Dis.2003；37(8)：1102-6)。

目前已經(jīng)確證HCV包膜糖蛋白E1-E2是與宿主細(xì)胞受體結(jié)合的唯一關(guān)鍵性分子，其中E2被認(rèn)為是最重要的分子。1998年P(guān)ileri等的研究表明人CD81(hCD81)可能是HCV的受體(Pileri，P.et?al.Binding?of?hepatitis?C?virusto?CD81.Science.1998；282：938-941)。隨后低密度脂蛋白受體(LDLR)(Agnello?V，et?al.Hepatitis?C?virus?and?other?flaviviridae?viruses?enter?cells?vialow?density?lipoprotein?receptor.Proc?Natl?Acad?Sci?USA.1999；96：12766-71)、清道夫受體B族I型(SR-BI)(Scarselli?E，et?al.The?human?scavenger?receptorclass?B?type?I?is?a?novel?candidate?receptor?for?the?hepatitis?C?virus.EMBO?J.2002；21(19)：5017-25)、鈣離子依賴型(C型)凝集素DC/L-SIGN(PohlmannS，et?al.Hepatitis?C?virus?glycoproteins?interact?with?DC-SIGN?and?DC-SIGNR.JVirol.2003；77(7)：4070-80)、Occludin(Ploss?A，et?al.Human?is?a?hepatitis?Cvirus?entry?factor?required?for?infection?of?mouse?cells.Nature.2009；457：882-6)和細(xì)胞連接骨架蛋白Clauding-1(Evans?MJ，et?al.Claudin-1is?a?hepatitis?Cvirus?coreceptor?required?for?a?late?step?in?entry.Nature.2007；446：801-5)等都被證實是HCV的可能受體，目前比較一致的看法是HCV通過包膜糖蛋白E2與CD81特異性結(jié)合，使病毒吸附于宿主細(xì)胞表面，但由于CD81介導(dǎo)的內(nèi)吞作用弱，病毒最終進(jìn)入細(xì)胞可能還需其他分子，如LDLR、SR-BI等來輔助，Clauding-1則在病毒穿入過程的后期起到關(guān)鍵作用(Helle?F，et?al.Hepatitis?C?virus?entry?into?host?cells.Cell?Mol.2008；65：100-12)。不同研究小組利用噬菌體肽庫法篩選HCV的穿入抑制劑，結(jié)果顯示具有SPQYWTGPA基序的多肽可以競爭抑制HCV?E2與hCD81的結(jié)合(Cao?J，et?al，Phage?displayselection?on?whole?cells?yields?a?small?peptide?specific?for?HCV?receptor?humanCD81.Cell?Res.2003；13(6)：473-9)、具有TSQNIRS基序的多肽可以抑制HCV侵染細(xì)胞(Hong?HW，et?al.Selection?of?Peptides?Binding?to?HCV?E2andInhibiting?Viral?Infectivity.J?Microbiol?Biotechnol.2010；20：1769-71)，這些都顯示了以阻斷HCV與受體結(jié)合為基礎(chǔ)設(shè)計抗病毒藥物的可行性(MeanwellNA.Hepatitis?C?virus?entry：an?intriguing?challenge?for?drug?discovery.Curr?OpinInvestigate?Drugs.2006；7(8)：727-32.和Pawlotsky?JM，et?al.The?hepatitis?Cvirus?life?cycle?as?a?target?for?new?antiviral?therapies.Gastroenterology.2007；132(5)：1979-98)。