[發(fā)明專利]一種人源性電壓門控鉀通道1.5免疫原性肽段及其用途

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110293643.6
• 申請日: 2011-09-30
• 公開（公告）號: CN102399266A
• 公開（公告）日: 2012-04-04
• 發(fā)明（設計）人: 劉坤;楊曉芳;連亦田;戴芝銀;楊勇;劉金平;王彥富;王朝暉;王敏;高翔;廖玉華;曾秋棠;劉琳玲
• 申請（專利權）人: 華中科技大學同濟醫(yī)學院附屬協和醫(yī)院
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C07K16/18;A61K39/395;A61P9/06
• 代理公司: 武漢開元知識產權代理有限公司 42104
• 代理人: 王和平

技術領域

本發(fā)明屬于生物技術領域，具體涉及一種人源性電壓門控鉀通道1.5的胞外環(huán)肽段E313的合成和針對該肽段制備的抗體，以及該抗體在作為人源性電壓門控鉀通道1.5和由其基因編碼的超快激活延遲整流鉀通道的特異性抑制劑的應用。?

背景技術

心房顫動，以下簡稱為房顫，是臨床上最常見的心律失常，可以誘發(fā)心絞痛和心力衰竭，并可導致血管栓塞等嚴重并發(fā)癥的發(fā)生，增加死亡率。將房顫心律恢復為竇性心律并長期維持即節(jié)律控制是房顫治療的重要策略。研究表明，心房肌的電重構在房顫的維持和復發(fā)中起關鍵作用且在房顫的早期已經發(fā)生，主要特征為心房肌動作電位時程和有效不應期的縮短。臨床上常用的房顫轉復藥物，如胺碘酮等III類抗心律失常藥物，因延長心房肌的動作電位時程和有效不應期，可以改善房顫時心房肌的電重構，從而抑制房顫的發(fā)作。外向復極鉀電流是其作用的主要部位。?

研究發(fā)現，人心房肌細胞上存在一種特有的外向復極鉀電流即超快激活延遲整流鉀電流，其英文全稱為ultrarapid?delayed?rectifier?K⁺?current，以下簡寫為I_Kur，而該電流不存在于人心室肌細胞。I_Kur在人心房復極中起著極為重要的作用，50％的抑制可引起動作電位時程延長66％。I_Kur通道的生物物理學和藥理學特性與人電壓門控性鉀通道1.5(human?voltage-gated?potassium?channel?1.5，hKv1.5)極類似，二者具有分子相關性。現已證實，I_Kur通道主要是由hKv1.5通道基因編碼表達的。hKv1.5通道基因位于人12號染色體短臂第1區(qū)第3條帶，英文簡寫為12p13，該通道蛋白是一種重要的電壓門控鉀離子通道，由四個結構相同的α亞基聚合成，每個α亞基由6個跨膜蛋白分子片段S1～S6以及N末端和C末端組成，并具有3個胞外環(huán)，分別為E1、E2和E3。其中S5，S6主要構成離子通道孔，是鉀離子進出細胞的部位。?

針對Kv1.5編碼序列的反義寡核苷酸在不改變其他電流的情況下，使I_Kur減小約50％。一些Kv1.5通道阻滯劑能延長心房肌的動作電位時程和有效不應期，抑制實驗性房顫的發(fā)作。這些研究顯示，對I_Kv1.5/I_Kur的阻滯，能有效延長心房肌的動作電位時程和有效不應期，改善房顫時心房肌的電重構，抑制房顫的發(fā)作；但不影響心室的復極電流，因而不導致長QT間期綜合征和尖端扭轉性室性心動過速的發(fā)生。因此，I_Kv1.5/I_Kur成為房顫治療新的、安全和理想的靶點。?

然而研究發(fā)現，相當多的一部分化合物在阻滯Kv1.5通道的同時亦能阻滯心臟中的電壓?門控鈉、鈣等離子通道。由于電壓門控鉀通道具有較高的結構同源性，使得不同的電壓門控鉀通道具有高度一致的藥物結合位點。研究發(fā)現，Kv1.5通道與心臟復極HERG和KCNQ1/KCNE1鉀通道阻滯劑結合位點高度保守，因而使得現有的一些Kv1.5通道阻滯劑，在阻滯Kv1.5通道的同時，亦對HERG和KCNQ1/KCNE1通道產生阻滯作用，常常會導致藥源性的心律失常的發(fā)生，阻礙了一些Kv1.5通道阻滯劑進一步開發(fā)成為臨床藥物。因此，美國食品和藥品管理局要求新上市的藥物應評估其對心臟復極電流的影響。?

抗體與抗原的結合具有親和力高，特異性強的特點，理論上開發(fā)出針對hKv1.5、具有阻滯效應的抗體可以作為hKv1.5通道特異性的阻滯劑。所有電壓門控鉀通道的跨膜片段S5和S6所構成的離子通道孔區(qū)是鉀離子進出細胞的關鍵部位。針對該部位胞外環(huán)肽段的抗體能夠對電壓門控鉀通道產生抑制作用。hKv1.5/IKur通道是一種功能性表達于人心房肌細胞上的電壓門控鉀通道，其組成氨基酸序列與其它的電壓門控鉀通道不同，因此可能制備針對該通道特定肽段的特異性抗體。如同其它針對離子通道孔區(qū)胞外環(huán)肽段的抗體，針對hKv1.5/IKur通道跨膜片段S5和S6所構成的離子通道孔區(qū)胞外環(huán)肽段的抗體，理論上能夠對hKv1.5/IKur通道產生特異性抑制作用，從而開發(fā)出一種新型、對房顫具有抑制作用的生物制劑。目前尚未見抗hKv1.5胞外環(huán)肽段E313抗體的相關報道。?

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的是提供一種人源性電壓門控鉀通道hKv1.5免疫原性肽段，基于該肽段制備的抗hKv1.5胞外環(huán)肽段E313抗體，可以作為hKv1.5通道以及由hKv1.5通道基因編碼表達的I_Kur通道新的、特異性抑制劑。?