[發明專利]一種用醋酸纖維素/聚四氟乙烯復合膜固定化磷脂酶的方法

無效

• 申請號: 201110290429.5
• 申請日: 2011-09-20
• 公開（公告）號: CN102304504A
• 公開（公告）日: 2012-01-04
• 發明（設計）人: 江連洲;胡立志;于殿宇;王立琦;時敏;張佳寧;李越;王雪;李志平;陳曉慧;常云鶴;周曉丹;劉晶
• 申請（專利權）人: 東北農業大學
• 主分類號: C12N11/12
• 分類號: C12N11/12;C12N11/08
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種用醋酸纖維素/聚四氟乙烯復合膜固定化磷脂酶的方法，其特征在于用復合膜來固定化磷脂酶的方法通過以下步驟實現：一、復合膜的制備：將15g醋酸纖維素60℃下溶于85g二甲基甲酰胺中得到鑄膜液。將聚四氟乙烯膜先用0.1mol/L的NaOH溶液和0.1mol/L的HCl溶液清洗，然后用去離子水清洗，真空干燥后，平鋪在潔凈的玻璃板上。控制厚度，將醋酸纖維素鑄膜液用特制的刮刀涂在聚四氟乙烯膜表面，在室溫下揮發適當的時間完成干相轉換后，浸入去離子水完成濕相轉換。12h后用去離子水清洗，自然干燥待用；二、磷脂酶的固定化：取若干份1cm²的醋酸纖維素/聚四氟乙烯復合膜于三角瓶中，分別加入一定量的酶液和pH＝5.0的磷酸氫二鈉/檸檬酸緩沖液，攪拌吸附一定時間。反應結束后取出酶膜，用去離子水沖洗，放于干燥處待其風干后測定酶活。三、酶活力的測定。四、固定化條件的優化：分別在酶液濃度0.02g/mL～0.07g/mL，吸附時間1h～6h，溫度45～70℃，攪拌速度80r/min～280r/min的條件下，通過測定固定化酶活力得到最佳的固定化條件。五、采用響應面法進行分析討論最終確定最佳固定化條件。六、通過固定化酶膜的SEM圖像進一步解釋利用醋酸纖維素/聚四氟乙烯復合膜固定化磷脂酶的優勢。

2.根據權利要求1所述的用醋酸纖維素/聚四氟乙烯復合膜固定化磷脂酶，其特征在于步驟四中將醋酸纖維素/聚四氟乙烯復合膜與酶液在酶液濃度0.04g/mL～0.06g/mL的條件下進行磷脂酶的吸附固定。

3.根據權利要求1所述的用醋酸纖維素/聚四氟乙烯復合膜固定化磷脂酶，其特征在于步驟四中將醋酸纖維素/聚四氟乙烯復合膜與酶液在酶液濃度0.02g/mL～0.07g/mL的條件下，吸附固定2h～4h。

4.根據權利要求1所述的用醋酸纖維素/聚四氟乙烯復合膜固定化磷脂酶，其特征在于步驟四中將醋酸纖維素/聚四氟乙烯復合膜與酶液在酶液濃度0.02g/mL～0.07g/mL，吸附時間1～6h的條件下，溫度為55～65℃。

5.根據權利要求1所述的用醋酸纖維素/聚四氟乙烯復合膜固定化磷脂酶，其特征在于步驟四中將醋酸纖維素/聚四氟乙烯復合膜與酶液在酶液濃度0.02g/mL～0.07g/mL，吸附時間1～6h，溫度45～70℃的條件下，攪拌速度160r/min～240r/min。

6.根據權利要求1所述的用醋酸纖維素/聚四氟乙烯復合膜固定化磷脂酶，其特征在于步驟五中采用響應面分析法進一步分析最佳固定化條件。