[發(fā)明專(zhuān)利]小豹斑鵝膏半人工栽培的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110289645.8
• 申請(qǐng)日: 2011-09-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103004456A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-04-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李宗菊;張曦予;劉弟
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 云南大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): A01G1/04
• 分類(lèi)號(hào): A01G1/04
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種野生毒菌小豹斑鵝膏半人工栽培的方法，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)是屬于大型真菌培養(yǎng)范疇。

背景技術(shù)

鵝膏菌屬（Amanita）隸屬于擔(dān)子菌亞門(mén)、層菌綱、傘菌目、鵝膏菌科（Amanitaceae），是有毒的大型真菌中較特殊、較有價(jià)值的一個(gè)世界性廣布大屬，其物種多樣性是非常豐富的。全球已報(bào)道近400種，中國(guó)已記錄的近100種（含亞種、變種及變型）。據(jù)考證，目前中國(guó)仍有不少種尚未研究和命名。但是如今隨著全球生態(tài)危機(jī)的出現(xiàn)，我國(guó)的許多大型真菌資源已告危，處于嚴(yán)重衰退及瀕危狀態(tài)，而部份種面臨著可能還沒(méi)有被人類(lèi)認(rèn)識(shí)或發(fā)現(xiàn)其價(jià)值時(shí)，就已滅絕的風(fēng)險(xiǎn)。

鵝膏菌屬中的大部份種屬于著名劇毒菌，據(jù)知，因誤食野生蕈菌中毒死亡者95%是因鵝膏菌所致。科學(xué)家們對(duì)鵝膏菌真正感興趣的是其毒性，因此，大約在140年前，人們就開(kāi)始了鵝膏菌毒素的研究。鵝膏菌毒素可分為四類(lèi)，其中最主要也是最重要的是肽類(lèi)毒素，肽類(lèi)毒素又包括鵝膏毒肽（amatoxins）、鬼筆毒肽（phallotoxins）和毒傘素類(lèi)（virotoxins）三種。?目前鵝膏毒素的應(yīng)用研究主要體現(xiàn)在以下幾方面：①可用于研究真核生物基因的表達(dá)、調(diào)控及細(xì)胞定位（amatoxins對(duì)真核生物RNA聚合酶Ⅱ的活性有專(zhuān)一性抑制作用）；②可開(kāi)發(fā)抗菌、抗病毒特效新藥；③可篩選抗腫瘤藥物；④可開(kāi)發(fā)鎮(zhèn)靜、麻醉及其它特效藥；⑤可用于生物防冶。

鵝膏菌屬大多屬于外生菌根真菌，目前尚不能人工栽培。其絕大部份種仍屬于自然界中難培養(yǎng)或未能培養(yǎng)的微生物，難以人工、半人工栽培，難以開(kāi)發(fā)利用。雖然已有少數(shù)的種能進(jìn)行菌絲的純培養(yǎng)，但也存在一些問(wèn)題，如菌絲生長(zhǎng)緩慢、菌絲中毒素含量不高。鵝膏多肽毒素是一種由7-8個(gè)被修飾了的稀有氨基酸組成的環(huán)肽,可能不是基因編碼的直接產(chǎn)物,而是經(jīng)過(guò)加工后的次級(jí)產(chǎn)物,?要克隆毒素的基因是復(fù)雜而困難的，且其化學(xué)合成品也沒(méi)有活性。因此，至今國(guó)內(nèi)外還沒(méi)有一種能規(guī)模化開(kāi)發(fā)的毒素產(chǎn)品。現(xiàn)作為生化試劑的肽類(lèi)毒素全部來(lái)源于歐美的毒鵝膏(Amanita?phalloides)子實(shí)體，銷(xiāo)價(jià)在每克10萬(wàn)美元以上。

鵝膏種群小，個(gè)體少，產(chǎn)量低，分布數(shù)量極其有限。加之對(duì)生境敏感，一旦生境受到破壞，極易消失或滅絕，屬于特殊的致危生物類(lèi)群，這更增加了其進(jìn)一步被研究、利用的難度。我國(guó)的Amanita毒蕈資源，在宋代陳仁玉的菌譜就有了記載，比西方最早的同類(lèi)研究專(zhuān)著早數(shù)百年，可惜由于我們對(duì)其研究、保護(hù)不夠重視，如今當(dāng)我們要進(jìn)一步利用、開(kāi)發(fā)它時(shí)，面臨的卻是資源枯竭的危險(xiǎn)。面對(duì)這些資源的悄然消失，我們還沒(méi)有被引起重視，我們還不積極采取各種措施來(lái)進(jìn)行挽救，那這種損失將是無(wú)法彌補(bǔ)的。

鵝膏的人工馴化或栽培是保證鵝膏資源可持續(xù)性利用的前提或關(guān)鍵，但此目前仍然屬于難以攻克的問(wèn)題及盲點(diǎn)。小豹斑鵝膏（?A..parvipantherina）屬于漸危種，其種群分布及毒性具有代表性或共性，如以此作為研究對(duì)象，研究結(jié)果對(duì)其它種群將具有較好的借鑒作用。因此，本發(fā)明重點(diǎn)對(duì)小豹斑鵝膏的半人工馴化栽培進(jìn)行了突破。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于，探索一種鵝膏人工培養(yǎng)的可行方法。

本發(fā)明的技術(shù)方案，其步驟為：

（1）菌絲體的快速繁殖：將已培養(yǎng)出的、長(zhǎng)勢(shì)良好的菌絲體挑出，剔除上面的培養(yǎng)基，切分成4～6份，每份為0.25cm²左右，將其輕輕嵌入500ml三角瓶的擴(kuò)大培養(yǎng)基表面，培養(yǎng)基為改良SPDM培養(yǎng)基（馬鈴薯200.00g/L、葡萄糖20.00g/L、MgSO₄1.00g/L、CaCl₂?1.00g?/L、KH₂PO₄?0.50g/L、NH₄NO₃?0.35g/L、KNO₃?0.35g?/L、維生素B₁?0.10mg/L、瓊脂12.00g/L)，補(bǔ)充麥芽汁（15.0～16.5波美）150～180ml，谷氨酸0.10～0.25g/L，生長(zhǎng)活性物質(zhì)10～15mg/L，?調(diào)節(jié)PH值為5.4～5.6，培養(yǎng)溫度為22～24℃，暗培養(yǎng)10～15天，菌絲長(zhǎng)滿(mǎn)三角瓶；