[發明專利]一種負載生物活性因子的仿生涂層制備方法

無效

• 申請號: 201110288240.2
• 申請日: 2011-09-26
• 公開（公告）號: CN102327645A
• 公開（公告）日: 2012-01-25
• 發明（設計）人: 李曉東;黃穎;李曉軍
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: A61L27/34
• 分類號: A61L27/34;A61L27/54;A61K6/04
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 張法高;趙杭麗

1.一種負載生物活性因子的仿生涂層的制備方法，通過以下步驟實現：

（1）RGD接枝的聚電解質的制備：?

將含雙硫鍵的RGD多肽鏈段GRGDSPC(S-S)CPSDGRG在碳化二亞胺：N-羥基琥珀酰亞胺催化體系存在的條件下，接枝到聚電解質上，將所得到的產物透析純化后，加入木蘇糖或者谷胱甘肽與之反應，得到甘氨酸-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-絲氨酸-脯氨酸-半胱氨酸-SH接枝的聚電解質，聚電解質分別為聚陽離子聚電解質和聚陰離子聚電解質；

所述的RGD是含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸的線性七肽結構，其肽鏈結構為甘氨酸-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-絲氨酸-脯氨酸-半胱氨酸-SH；

所述聚電解質的濃度為0.1-50mg/ml，多肽鏈段的量與聚電解質中羧基含量的摩爾比為1：10000-1：1，碳化二亞胺:?N-羥基琥珀酰亞胺的用量為1：1-20：1,?碳化二亞胺的用量與多肽鏈段的用量的摩爾比為1：1-10：1，木蘇糖或者谷胱甘肽的濃度與催化體系中雙硫鍵的摩爾比為1：1-50：1；

（2）聚電解質溶液的配制：

聚陽離子電解質溶液配置：將步驟（1）獲得的RGD接枝的聚陽離子聚電解質或未改性的聚電解質陽離子配制成溶液，并在其中添加生物活性因子BMP-2或bFGF；

聚陰離子電解質溶液的配制：將步驟（1）獲得的RGD接枝的聚陰離子聚電解質或未改性的聚陰離子電解質配制成溶液；

其中各種聚電解質溶液的濃度范圍為0.1mg/ml-10mg/ml，聚電解質溶液中NaCl濃度為0.1-0.2mol/L，pH值為4.0，BMP-2的濃度為0.5-1000μg/ml，bFGF濃度為20-1000μg/ml；

（3）仿生涂層的制備：

將步驟（2）配置的溶液作如下組合：（a）添加生物活性因子BMP-2或bFGF的RGD接枝的聚陽離子聚電解質溶液和未改性的聚陰離子電解質溶液；（b）RGD接枝的聚陰離子聚電解質溶液和添加生物活性因子BMP-2或bFGF的未改性的聚陽離子電解質溶液；（c）添加生物活性因子BMP-2或bFGF的RGD接枝的聚陽離子聚電解質溶液和RGD接枝的聚陰離子聚電解質溶液；

用(a)-(c)任一組溶液，首先在鈦基種植體表面沉積聚陽離子電解質和生物活性因子，沉積一定時間后，充分水洗，然后沉積聚陰離子電解質層，沉積一定時間后，充分水洗，以上操作記為一次沉積循環，根據需要重復以上循環操作，最后得到需要的聚電解質復合層，然后，在濃度為0.5-10?mM的氯胺T溶液或者濃度為1-50?mM的雙氧水溶液中浸泡，取出，充分水洗，得到負載生物活性因子的仿生涂層；在氯胺T中的浸泡時間為5-180秒，在雙氧水中浸泡時間為5-60分鐘。

2.根據權利要求1所述的一種負載生物活性因子的仿生涂層的制備方法，其特征在于，步驟（1）中所述的所述聚陽電解質選用Ι型膠原、殼聚糖、酸溶明膠、聚精氨酸、聚賴氨酸、聚組氨酸中的一種或者幾種，得到的產物是RGD接枝的聚陽離子電解質，聚陽離子電解質的分子量為100-2000000D；聚陰電解質選用透明質酸、堿溶明膠、聚谷氨酸、聚天冬氨酸中的一種或者幾種，得到的產物是RGD接枝的聚陰離子電解質，聚陰離子電解質的分子量為100-5000000D。

3.根據權利要求1所述的一種負載生物活性因子的仿生涂層的制備方法，其特征在于，步驟（3）中一層聚陰離子電解質層或聚陽離子電解質層所用的沉積時間為5min-20min，所需的沉積循環為0.5-50次。

4.根據權利要求1所述的一種負載生物活性因子的仿生涂層的制備方法，其特征在于，步驟（3）中所用的種植體表面為各種永久植入型種植體表面，選用經氧化性酸處理的純鈦或者鈦合金表面、非氧化型酸處理的純鈦或者鈦合金種植體表面、噴砂/酸處理的表面、堿熱法得到的純鈦或者鈦合金種植體表面、電化學得到的表面、羥基磷灰石涂層的純鈦或者鈦合金種植體表面、鈦或者羥基磷灰石噴漿表面的純鈦或者鈦合金種植體表面、鈦噴漿/酸處理的純鈦或者鈦合金表面、離子注入的純鈦或者鈦合金種植體表面、或激光處理的純鈦或者鈦合金種植體表面。