[發明專利]一株多菌靈降解木霉菌株及其制備方法

有效

• 申請號: 201110287929.3
• 申請日: 2011-09-26
• 公開（公告）號: CN102329740A
• 公開（公告）日: 2012-01-25
• 發明（設計）人: 鄭恩澤
• 申請（專利權）人: 鄭恩澤
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;A01N63/04;A01P3/00;B09C1/10;C12R1/885
• 代理公司: 濟南舜源專利事務所有限公司 37205
• 代理人: 辛向東

技術領域

本發明屬于生物高技術領域，涉及一種多菌靈農藥殘留降解木霉，是利用微生物的方法降解化學農藥殘留，適用于現代農業生產中綠色無公害農產品的生產與加工。

背景技術

多菌靈（Carbendazim，MBC）是一種廣譜高效低毒的內吸性殺菌劑，化學名稱為N-（2-苯并咪唑基）氨基甲酸甲酯，對各種農作物、瓜果蔬菜病害具有較好的防治效果，也是其他殺菌劑，例如苯菌靈、甲基硫菌靈等咪唑類殺菌劑的代謝中間產物。據統計，我國2006年農藥需求總量（有效含量）為29.96萬噸，其中多菌靈的需求量在0.8～1.0萬噸。多菌靈在土壤和水中性質非常穩定，降解半衰期較長，在蔬菜、果品和土壤中殘留與累積可通過食物鏈影響人體健康，例如導致染色體畸變，引起肝病等。2002年被我國列為環境激素類化學農藥。因此，多菌靈在環境中的降解研究愈來愈受到人們的關注。

生物降解是去除環境中多菌靈殘留的主要途徑，目前已報道的多菌靈降解菌均為細菌類。現有的木霉菌類對多菌靈幾乎沒有降解功能，甚至在多菌靈污染嚴重的土壤中無法生存和繁殖。

發明內容

本發明目的是針對現有技術的不足，提供一株具有多菌靈降解作用的生防木霉菌株及其

制備和應用。

????本發明提供的一株可降解多菌靈的生防菌株為木霉（Trichoderma?sp.）Tr1，該菌株已在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏；保藏號為CGMCC?No.5210，保藏時間為2011年9?月?1?日，保藏地址為北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所。

本發明所述的可降解多菌靈的木霉菌株（Trichoderma?sp.）Tr1是利用含有多菌靈的無機鹽培養基，從受多菌靈污染的土壤中分離、篩選、培養獲得的。該菌株不僅對多菌靈具有良好的降解效果，對各種病原菌也具有一定的抑菌效果。該發明為獲得降解多菌靈的木霉菌制品奠定了基礎。

?????本發明所述的可降解多菌靈的生防菌株木霉（Trichoderma?sp.）Tr1的分離培養條件，包括下列步驟：

采集日照東港區三莊鎮吉洼村某長期施用多菌靈的葡萄園耕作土層（10-30cm），稱取土樣10g，加到100ml多菌靈濃度為1000μg/ml的無機鹽培養基中，28℃150r/min搖床培養7d，吸取10ml培養液轉接到相同培養基中，培養7d，共連續轉接5次。取1ml培養液，稀釋10^-5，取200μl培養液均勻涂布于固體無機鹽培養基（其中添加100μg/ml鏈霉素用于抑制細菌）中，28℃培養至平板上出現單菌落，將菌株轉接到PDA平板（其中添加100μg/ml鏈霉素用于抑制細菌）上，28℃恒溫培養，反復純化至純培養后，轉接到無機鹽培養基中繼續搖床培養，利用HPLC檢測菌株對多菌靈的降解能力，篩選對多菌靈降解能力最強的菌株進行保藏，即為保藏號為CGMCC?No.5210的木霉（Trichoderma?sp.）Tr1菌株。

????將上述培養篩選獲得的菌株轉接到PDA平板上，發現該菌株在PDA平板上菌落初期氣生菌絲呈白色致密叢束狀，邊緣松散，呈發散狀生長，背面初期無色，后期出現菌絲產孢區，顏色從淺綠漸至深綠色。分生孢子梗從菌絲側枝生出，呈十字輪生排列，頂生分生孢子，分生孢子光滑，亞球形至卵形（圖1）。通過一系列培養形狀及光學顯微鏡觀察，經鑒定為木霉屬（Trichoderma?sp.）。

????上述培養、篩選木霉（Trichoderma?sp.）Tr1的培養基配方如下：

?????無機鹽培養基（g/L）：NaCl?1.0g，K₂HPO_4?1.5g，KH₂PO₄?0.5g，MgSO₄·7H₂O?0.2g，NH₄NO₃?1.0g，蒸餾水?1000mL，多菌靈（100mg/mL）10ml。

?????固體無機鹽培養基（g/L）：上述無機鹽培養基中添加瓊脂10g。

?????PDA培養基：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂?15g，蒸餾水?1000ml。

?????本發明所述木霉（Trichoderma?sp.）Tr1的發酵生產方法如下：