[發明專利]高效液相色譜分析方法及其應用

有效

• 申請號: 201110285805.1
• 申請日: 2011-09-23
• 公開（公告）號: CN103018389A
• 公開（公告）日: 2013-04-03
• 發明（設計）人: 岳崇斌;岳光;趙德
• 申請（專利權）人: 北大方正集團有限公司;北大國際醫院集團重慶大新藥業股份有限公司;北大國際醫院集團有限公司
• 主分類號: G01N30/89
• 分類號: G01N30/89
• 代理公司: 北京天昊聯合知識產權代理有限公司 11112
• 代理人: 丁業平;張天舒

1.一種高效液相色譜分析方法，所述分析方法包括：對含有甾體類化合物的混合物用高效液相色譜法進行成分分析；

其中，所述高效液相色譜法采用反相高效液相色譜，并且采用梯度洗脫，其中所述梯度洗脫的流動相分別為水和95％乙腈。

2.根據權利要求1所述的分析方法，其中，所述甾體類化合物包括：雄烯二酮和/或植物甾醇；優選地，所述植物甾醇包含菜籽甾醇、菜油甾醇、豆甾醇和/或β-谷甾醇。

3.根據權利要求1所述的分析方法，其中，所述高效液相色譜法采用的檢測器為二極管陣列檢測器。

4.根據權利要求3所述的分析方法，其中，所述高效液相色譜法采用的檢測波長為210nm。

5.根據權利要求1所述的分析方法，其中，所述梯度洗脫的條件按時間分段設定為：

0至6分鐘，水為10-15體積份、95％乙腈為90-85體積份；

大于6分鐘至30分鐘，水為0體積份、95％乙腈為100體積份；

大于30分鐘至35分鐘，水為10-15體積份、95％乙腈為90-85體積份。

6.根據權利要求5所述的分析方法，其中，所述梯度洗脫的時間與流速的程序如下表所示：

7.根據權利要求5所述的分析方法，其中，所述流動相分別在A泵和B泵中流動，并且所述梯度洗脫的條件為：

其中，所述A泵中為水，所述B泵中為95％乙腈。

8.根據權利要求1所述的分析方法，其中，所述高效液相色譜法采用十八烷基硅烷鍵合硅膠柱，并且所述十八烷基硅烷鍵合硅膠柱為150mm×4.6mm，柱溫為30℃，進樣量為3-20μl。

9.根據權利要求1-8中任一項所述的分析方法，所述分析方法進一步包括對所述混合物中各成分的含量進行測定，所述測定包括：

1)分別配制不同濃度的雄烯二酮、菜籽甾醇、菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇的標準溶液，采用所述高效液相色譜法分別測定所述各標準溶液的峰面積，并針對雄烯二酮、菜籽甾醇、菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇分別繪制峰面積-濃度標準曲線；

2)將所述混合物配制成樣品溶液，采用所述高效液相色譜法測定所述樣品溶液的峰面積；以及

3)由所述標準曲線計算出所述樣品溶液中各成分的濃度，并由此計算出所述混合物中各成分的含量。

10.權利要求1-9中任一項所述的分析方法在植物甾醇微生物轉化生產雄烯二酮中的應用，該應用包括：采用所述分析方法對該微生物轉化過程中的發酵液進行成分分析。

11.根據權利要求10所述的應用，該應用還包括：根據所述成分分析的結果，確定所述發酵液中菜籽甾醇、菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇的濃度，并由此對所述微生物轉化中采用的植物甾醇進行選擇。

12.根據權利要求10所述的應用，該應用還包括：根據所述成分分析的結果，確定所述發酵液中雄烯二酮和/或植物甾醇的濃度，并由此確定生產的進程和/或生產的終點。