[發明專利]與老年癡呆癥發病相關的細胞周期依賴性激酶5的單核苷酸多態性位點

無效

• 申請號: 201110285787.7
• 申請日: 2011-09-23
• 公開（公告）號: CN103013989A
• 公開（公告）日: 2013-04-03
• 發明（設計）人: 葉玉如;萬峻;熊軼;陳向軍;方征宇;張巨峰;關明;于波
• 申請（專利權）人: 深圳北京大學香港科技大學醫學中心
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 陳衛

技術領域

本發明涉及基因工程技術領域，具體涉及與老年癡呆癥發病相關的細胞周期依賴性激酶5的單核苷酸多態性位點。

背景技術

神經退行性病變包括老年癡呆癥、帕金森氏病等多種疾病，是老年人群發生癡呆癥狀的最常見的病因。此類疾病引起神經元細胞和突觸的退行性變，腦組織萎縮以及記憶力衰退，嚴重影響了患者的社交、自理能力，導致生活質量大幅度下降。典型的老年癡呆癥病理改變包括：神經細胞內纖維纏結（neurofibrillary?tangles,?NFTs）和老年斑（senile?plaques,?SPs）的形成。目前，針對老年癡呆癥仍沒有有效的治療手段。

細胞周期蛋白依賴性激酶5?(cyclin?dependent?kinases?5,?CDK5)?基因位于7號染色體，含有12個外顯子，編碼987個堿基長度的mRNA。CDK5蛋白分子量為33KD，與其激活因子結合后具有激酶活性并能調節細胞周期進程及神經細胞分化。目前大量證據顯示，CDK5基因在突觸發育，突觸可塑性形成中均發揮重要的作用。CDK5活性的異常升高可導致神經細胞死亡，說明CDK5活性的調控對神經細胞存活具有重要的意義。研究表明，Tau蛋白是CDK5的一個重要底物，在老年癡呆癥患者腦部組織中被過度磷酸化，并喪失功能^[7]，進而聚合成NFTs。在含有大量NFTs的神經元細胞中，CDK5的活性大大降低，說明了CDK5在NFTs的形成中發揮重要作用^[8]。另一方面，CDK5可以直接磷酸化淀粉樣蛋白前體(amyloid?precursor?protein，APP)的668位點，對SPs的形成也是一重要因素。這些研究結果表明，CDK5不僅能夠超磷酸化Tau蛋白，并且還能通過老年斑的形成，從而介導神經元死亡。

雖然大量的研究從分子機制角度闡明了CDK5在AD發生中的作用，但CDK5基因的遺傳多態性與AD的關聯性研究，特別是在漢族人群中，還鮮有報道。

發明內容

本發明的目的在于通過對CDK5基因全長測序，并與正常對照組比對，我們從中選中了5個單核苷酸多態性位點，發現CDK5基因的多態性可能是AD發生地一個危險因素。

本發明上述目的通過以下技術方案予以實現：

本發明通過聚合酶鏈式反應等方法檢測47例患者及51例年齡匹配正常對照組中細胞周期依賴性激酶5的基因多態性，綜合分析基因頻率、等位基因頻率分布與老年癡呆癥發生的相關性分析，結果顯示，與正常對照組相比，rs2069452和rs2069459的等位基因頻率和單倍體分析結果表明，其與老年癡呆癥的發生存在相關性。

附圖說明

圖1~4為所選取的5個SNPs及其測序圖譜。

具體實施方式

以下結合實施例來進一步解釋本發明，但實施例并不對本發明做任何形式的限定。

實施例

病例收集

選擇從2008年7月-2009年12月在上海復旦大學附屬華山醫院就診的原發性老年癡呆病人47例，均為漢族。AD診斷標準參照美國國家神經疾病和中風研究所?(National?Institute?of?Neurological?Disorders?and?Stroke,?NINDS)/阿爾茨海默氏癥及相關疾病協會?(Alzheimer's?Disease?and?Related?Disorders?Association,?ADRDA)的診斷標準進行。每個病患均由獨立兩位神經科醫生分別進行病史詢問及家系調查，包括：詳細的調查問卷，基礎水平測試及外周血采集。51例年齡匹配的正常對照組，來自北京大學深圳醫院，排除各種器質性疾病的健康人外周血。所有病人都已對收集樣本的目的和意義知情并簽字同意，所有采樣過程均符合北京大學制定的學術道德規范。

聚合酶鏈反應?(polymerase?chain?reaction，PCR)