[發明專利]一種判定中國大陸漢族人rs4840568和rs13277113單核苷酸多態性與SLE之間的相關性的方法

有效

• 申請號: 201110285741.5
• 申請日: 2011-09-23
• 公開（公告）號: CN103014139A
• 公開（公告）日: 2013-04-03
• 發明（設計）人: 于波;關明;萬峻;張偉;張超;張杰;楊虹;陳辦成
• 申請（專利權）人: 深圳北京大學香港科技大學醫學中心
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 陳衛

技術領域

????本發明涉及基因工程領域，具體涉及一種判定中國大陸漢族人rs4840568和rs13277113單核苷酸多態性與SLE之間的相關性的方法。

背景技術

????系統性紅斑狼瘡（SLE）是一種可累及多器官包括皮膚、關節、漿膜、腎臟、心血管系統和中樞神經系統的慢性自身免疫性疾病。本病的主要特征是自身抗體的產生和免疫復合物的形成，以及隨之產生的多器官組織炎癥反應。盡管對SLE已有大量研究，但目前對其病因僅有部分的了解。目前已經明確，環境因素和基因因素在SLE的發生發展中有重要的作用。近期，對高加索人口進行全基因組關聯分析研究發現SLE的幾個易感基因，包括MHC，BLK，ITGAM，STAT4，IRF5，BANK1和ETS1，且其與SLE的相關性已經通過后續的基因分型研究得以證實。這些研究為更深入的了解SLE這個復雜的疾病提供了理論。

B淋巴細胞酪氨酸激酶（BLK）是Src激酶家族的一個成員，主要參與B淋巴細胞受體信號的傳遞，對B淋巴細胞的生長及其功能的成熟有重要的作用。全基因組關聯分析在高加索人口中首次發現了BLK基因遺傳變異與SLE相關。此后，幾項研究證實了亞洲人BLK基因的單核苷酸多態性（SNPs）與SLE相關。在BLK的SNPs中，啟動子區域的rs13277113可影響BLK的表達，并與高加索和瑞典人SLE相關。這一基因座與SLE的相關性隨后在日本、中國香港及泰國人中得到進一步的證實，而在中國大陸人中并未有報道（Ito?I,?Kawasaki?A,?Ito?S?et?al.?Replication?of?the?association?between?the?C8orf13-BLK?region?and?systemic?lupus?erythematosus?in?a?Japanese?population.?Arthritis?Rheum?2009;60?2:?553-8.和Yang?W,?Ng?P,?Zhao?M?et?al.?Population?differences?in?SLE?susceptibility?genes:?STAT4?and?BLK,?but?not?PXK,?are?associated?with?systemic?lupus?erythematosus?in?Hong?Kong?Chinese.?Genes?Immun?2009;10?3:?219-26.）。除了rs13277113外，rs4840568與rs13277113的連鎖不平衡與BLK的低表達相關。但是很少有證據支持亞洲人，尤其是中國大陸漢族人rs4840568與SLE也有類似的相關性。在此，我們擬通過新近發展起來的非標記探針高分辨率溶解曲線法，來研究中國大陸漢族人rs4840568和rs13277113單核苷酸多態性與SLE發病風險的相關性。

發明內容

????本發明的目的在于根據現有的對SLE研究中存在的不足，提供一種方法，可以用于判定中國大陸漢族人rs4840568和rs13277113單核苷酸多態性與SLE發病風險的相關性。

????本發明上述目的通過以下技術方案予以實現：

????一種判定中國大陸漢族人rs4840568和rs13277113單核苷酸多態性與SLE之間的相關性的方法，該方法是非標記探針的高分辨率溶解曲線法。

更進一步地，上述方法包括如下步驟：

（1）基因分型：取外周血基因組DNA，鑒定其基因型；

（2）統計學分析：單核苷酸多態性與疾病相關性分析通過SLE患者與正常人群次等位基因頻率比較，以及用卡方檢驗或Fisher’s?精確概率法得出的Hardy-Weinberg平衡定律結果來分析，P值小于0.05認為是有統計學意義；

（3）針對B淋巴細胞酪氨酸激酶啟動子區域的rs1327711?3和rs4840568設計非標記探針，用于鑒別三種基因型的單核苷酸多態性，所述rs13277113的非標記探針序列如SEQ?ID?NO:1所示；所述rs4840568的非標記探針的序列為如SEQ?ID?NO:2所示。

????與現有技術相比，本發明具有如下有益效果：

????本發明所述方法是通過非標記探針的高分辨率溶解曲線法進行SLE患者進行基因分型，進而判定中國大陸漢族人rs4840568和rs13277113單核苷酸多態性與SLE之間的相關性。目前已經明確環境因素和基因因素在SLE的發生發展中有重要的作用，因此，本發明的研究結果為更深入的了解SLE疾病提供了理論依據。

附圖說明