[發明專利]一種判定中國漢族人IL-12b基因rs6887695單核苷酸多態性與系統性紅斑狼瘡相關性的方法

無效

• 申請號: 201110285691.0
• 申請日: 2011-09-23
• 公開（公告）號: CN103014138A
• 公開（公告）日: 2013-04-03
• 發明（設計）人: 張偉;于波;邵勇;萬峻;關明;吳琦;張杰;劉立
• 申請（專利權）人: 深圳北京大學香港科技大學醫學中心
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 陳衛

1.一種判定中國漢族人IL-12b基因rs6887695單核苷酸多態性與系統性紅斑狼瘡相關性的方法，其特征在于所述方法是非標記探針的高分辨率溶解曲線法。

2.根據權利要求1所述中國漢族人IL-12b基因rs6887695單核苷酸多態性與系統性紅斑狼瘡相關性的方法，其特征在于所述方法包括如下步驟：

（1）基因分型：取外周血基因組DNA，采用非標記探針的高分辨率溶解曲線法鑒定其基因型；

（2）統計學分析：采用卡平方檢驗或Fisher精確檢驗比較次要等位基因頻率在病例組與正常組之間的差異來分析SNP是否與疾病相關，以及所采集的樣本是否符合Hardy-Weinberg平衡定律結果來分析，用OR值及95%置信區間的方式表示SNP與疾病之間的關聯程度，P值小于0.05認為是有統計學意義。

3.根據權利要求2所述中國漢族人IL-12b基因rs6887695單核苷酸多態性與系統性紅斑狼瘡相關性的方法，其特征在于所述非標記探針的高分辨率溶解曲線法是：首先進行不對稱PCR，20?mL體系含基因組DNA模板20?ng，1′PCR緩存液，200?mM?dNTPs，0.5?U?rTaq?DNA聚合酶，0.05?mM正向引物，0.5?mM反向引物和0.5?mM?C3封閉的探針。

4.PCR反應在Bio-Rad?S1000?PCR儀上進行；PCR擴增條件如下：94℃預變性2分鐘，繼之進行50個循環，包括94℃變性30s，55℃退火30s，72℃延伸20s，最后72℃延伸5?min；反應結束后轉移10?mL?PCR產物到HR-1專用的毛細管中，再加入1?mL?LCGreen?Plus染料后，最后以HRM?in?CFX96?實時熒光系統C1000?Thermal?Cycler進行檢測；樣本先95℃變性30s，再迅速冷卻到40℃?30s，然后以0.3℃/s?速率從55℃升溫至90℃熔化，熔化曲線用Bio-Rad?Precision分析軟件進行分析；所述rs6887695引物序列為：正向SEQ?ID?NO:1，反向SEQ?ID?NO:2；非標記C3阻斷探針序列：SEQ?ID?NO:3。