[發明專利]基于部花菁的檢測次氯酸的熒光探針及其制備方法

無效

• 申請號: 201110284700.4
• 申請日: 2011-09-22
• 公開（公告）號: CN102391855A
• 公開（公告）日: 2012-03-28
• 發明（設計）人: 鄭洪;王淑萍;詹心琪
• 申請（專利權）人: 廈門大學
• 主分類號: C09K11/06
• 分類號: C09K11/06;C07D209/12;G01N21/64
• 代理公司: 廈門南強之路專利事務所 35200
• 代理人: 馬應森

技術領域

本發明涉及一種熒光探針，尤其是涉及一種以二甲胺基硫代甲酰基為酚羥基保護基團、以部花菁為熒光團的熒光探針及其制備和在中性條件下水溶液中次氯酸熒光法檢測中的應用。

背景技術

次氯酸(HClO)是生物體髓過氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)介導產生的一種重要的活性氧物種，在多種生理、病理過程中扮演重要角色。設計合成具有高靈敏性、專一性強的HClO熒光探針，建立應用于細胞內HClO的熒光顯微成像方法，實現目標分子實時、原位的示蹤，為研究生物體內與HClO相關的分子和細胞事件，以及與之相關的疾病的藥物篩選與評價提供可靠信息，具有重要的科學意義及應用前景。該領域已成為人們研究的熱點之一。

近幾年來，已報道了數種針對HClO的熒光探針，如DCFH、DHR(參見文獻：A.Bizyukin，et?al，Bull.Exp.Biol.Med.1995，119，347.)、APF(參見文獻：T.Nagano，et?al，J.Biol.Chem.2003，278，3170.)、MitoAR(參見文獻：T.Nagano，et?al，J.Am.Chem.Soc.2007，129，10324.)等，但以上探針除了能夠檢測HClO，對其他的活性氧物種亦有不同程度的熒光響應。由于每種活性氧都有其各自獨特的生理活性，因此對專一性強的HClO熒光探針的需求顯得尤為迫切。已報道的另外一些HClO探針中，有的需在強堿性(如pH?12)的苛刻條件下使用(參見文獻：H.M.Ma，et?al，Chem.Eur.J.2008，14，4719.)，或水溶性差(參見文獻：W.Tan?et?al，Chem.Eur.J.2009，15，2305.)，無法真正應用于生物體系中。目前，能夠實際應用于中性條件下水溶液中HClO檢測的熒光探針極少，且需在繁瑣苛刻的條件下高成本制備而得(參見文獻：T.Nagano，et?al，J.Am.Chem.Soc.2007，129，7313.；文獻：J.Tae，et?al，Org.Lett.2009，11，(4)，859.；文獻：R.Weissleder，P.Libby，et?al，Chem.Biol.2007，14，1221.)。

發明內容

本發明的目的在于針對已報道的各種HClO熒光探針所存在的不足與缺陷，提供一類高靈敏、高選擇性的基于部花菁的檢測次氯酸的熒光探針及其制備方法。

所述基于部花菁的檢測次氯酸的熒光探針(以下記為探針1)的分子結構式如下：

探針1

所述基于部花菁的檢測次氯酸的熒光探針為含有部花菁熒光團結構的、以二甲胺基硫代甲酰基為酚羥基保護基的二甲胺基硫代甲脂基部花菁化合物。

所述基于部花菁的檢測次氯酸的熒光探針的合成路線如下所示：

其合成方法的步驟為：

1)中間體A的合成：在容器中按摩爾比加入1.0份的氫化鈉，N₂氣氛下加入DMF，冰浴下攪拌后將溶有1.0份對羥基苯甲醛的干燥DMF溶液滴入其中，維持N₂氣氛，攪拌后撤去冰浴，在N₂氣氛下將混合物加入另一事先溶解有1.0份二甲胺基硫代甲酰氯的干燥DMF溶液，反應混合物以二氯甲烷稀釋1.0～2.0倍，所得有機相依次以飽和氯化鈉和水洗滌，旋轉蒸發抽干二氯甲烷，以柱色譜分離，得白色的中間體A；

2)中間體B的合成：在容器中按摩爾比加入1.0份2，3，3-trimethyl-3H-indole，及3.0份1，4-butane?sultone于鄰二氯苯溶劑中，溶解，于氮氣氛下油浴中加熱回流攪拌，反應混合物冷卻后倒入冰凍的丙酮中，有黑紅色固體析出，以冰凍丙酮洗滌，得呈粉紅色粉末的中間體B；

3)目標產物基于部花菁的檢測次氯酸的熒光探針的合成：在容器中等摩爾比加入中間體A和中間體B，以乙醇溶解，再加入1.0～3.0份哌啶；混合物在氮氣氣氛下反應，再旋轉蒸發抽干溶劑，固體殘余物以柱色譜分離，得橙黃色的目標產物基于部花菁的檢測次氯酸的熒光探針。