[發明專利]金烏賊胚胎細胞染色體標本制備方法

無效

• 申請號: 201110284116.9
• 申請日: 2011-09-22
• 公開（公告）號: CN102509504A
• 公開（公告）日: 2012-06-20
• 發明（設計）人: 王曉華;王琛;吳彪;陳四清;劉長琳;莊志猛;燕敬平;劉克奉;孫建明
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院黃海水產研究所
• 主分類號: G09B23/36
• 分類號: G09B23/36
• 代理公司: 北京中偉智信專利商標代理事務所 11325
• 代理人: 張岱

1.一種利用金烏賊胚胎細胞制備染色體標本的方法，它的操作程序是剝膜、前處理、低滲處理、固定、解離、滴片、染色以及洗片，其特征在于所述的滴片采用熱滴片法，溫度40℃-60℃，滴片高度1.8m-2m，每滴完一滴后用吸水紙在液滴中間位置吸除多余的液體。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述的剝膜：使用鑷子固定卵，用解剖針挑破卵膜；然后雙手各持一鑷子從破膜開口處外翻卵膜，逐漸剝離卵膜，露出胚胎；

所述的前處理：剝膜后的胚胎采用秋水仙素進行前處理，將胚胎細胞浸入0.04％的秋水仙素溶液中處理30min；

所述的低滲處理：采用KCl作為低滲液，濃度為5％，處理45min，低滲處理前去凈秋水仙素；

所述的固定：采用卡諾氏液，即甲醇：冰醋酸＝3∶1(體積比)固定，間隔15min更換固定液一次，共更換3次固定液，第一次加固定液前需移除一半低滲液；

所述的解離：采用濃度為50％冰醋酸進行解離45min，解離前去凈固定液；

所述的滴片：采用熱滴片法，溫度40℃-60℃，滴片高度1.8m-2m，每滴完一滴后用吸水紙在液滴中間位置吸除多余的液體；

所述的染色：采用10％Giemsa染液染色，即Giemsa原液1ml，PH?6.8的磷酸緩沖液9ml，染色時間30min；

所述的洗片：用自來水沖洗玻片，沖洗時有液滴的面朝上，玻片向下傾斜，玻片下端與水平面成30°，玻片磨砂面與水流接觸，水流以滴剛成線狀，慢慢沖洗，至沖洗后的水不再帶有顏色為止。