[發明專利]白沙蒿γ-生育酚甲基轉移酶(As-γ-TMT)基因及用途

無效

• 申請號: 201110281071.X
• 申請日: 2011-09-10
• 公開（公告）號: CN102367447A
• 公開（公告）日: 2012-03-07
• 發明（設計）人: 張麗靜;傅華;趙亞民;張一弓
• 申請（專利權）人: 蘭州大學
• 主分類號: C12N15/54
• 分類號: C12N15/54;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/82;C12N15/84;A01H5/00
• 代理公司: 蘭州振華專利代理有限責任公司 62102
• 代理人: 張晉

1.白沙蒿γ-生育酚甲基轉移酶基因，其特征是其基因序列為SEQ?1。

2.白沙蒿γ-生育酚甲基轉移酶基因，其特征是其基因序列為SEQ?10。

3.權利要求1或2所述的白沙蒿γ-生育酚甲基轉移酶基因制備方法，其特征是首先提取白沙蒿的RNA，再反轉錄為cDNA；利用GenBank中已公布的其它植物的白沙蒿-生育酚甲基轉移酶基因基因的核苷酸序列和氨基酸序列進行同源性分析，根據保守區設計合成一對簡并引物P1、P2；以得到的白沙蒿cDNA為模板擴增得到白沙蒿白沙蒿γ-生育酚甲基轉移酶基因核心片段核苷酸序列；根據測序得到的白沙蒿γ-生育酚甲基轉移酶基因基因核心片段序列分別設計白沙蒿γ-生育酚甲基轉移酶基因特異引物5’端外側引物P3和巢式引物P4，分別與GeneRacer^TM試劑盒中自帶的5’P和5’NP配對，以白沙蒿cDNA為模板，進行5’外側和巢式PCR擴增反應，得到5’末端核苷酸序列；同樣根據測序得到的白沙蒿γ-生育酚甲基轉移酶基因核心片段序列分別設計白沙蒿γ-生育酚甲基轉移酶基因特異引物3’端外側引物P5和巢式引物P6，分別與GeneRacer^TM試劑盒中自帶的3’P和3’NP配對，以白沙蒿cDNA為模板，進行3’外側和巢式PCR擴增，得到3’末端核苷酸序列；將所得到的三段序列，白沙蒿白沙蒿γ-生育酚甲基轉移酶基因核心片段核苷酸序列、5’末端核苷酸序列和3’末端核苷酸序列，進行拼接，得到目標基因。

4.權利要求3所述的白沙蒿γ-生育酚甲基轉移酶基因制備方法，其特征是采用白沙蒿的葉片提取RNA。

5.權利要求3或4所述的制備方法中所用的相關引物，其特征是：

上游引物P1：

5’-AYGAGTCKTCYGGVWTWTGG-3’

下游引物P2：5’-WATCCYTCWATCATCARTGG-3’

P3為：5’-CCTTGCGCTACCCCCGATGCCACACC-3’

P4為：5’-TCAGATATCTCCACAACAGCACCAGG-3’

5’P為：5’-CGACTGGAGCACGAGGACACTGA-3’

5’NP為：5’-GGACACTGACATGGACTGAAGGAGTA-3’

P5為：5’TACCTTCCTGCTTGGTGTTCTACGGC-3’

P6為：5’-TTAGTAATGCCACTGATGATAGAGGG-3’

3’P為：5’-GCTGTCAACGATACGCTACGTAACG-3’

3’NP為：5’-CGCTACGTAACGGCATGACAGTG-3’

P7：5’-CGTCTAGA?ATGCATCATGGCTTTTATG-3’

P8：5’-CGGAGCTCTTATTCAGGCTTTTTAC-3’

其中：R＝A?or?G；Y＝C?or?T；K＝G?or?T；W＝A?or?T。

6.權利要求1或2所述的白沙蒿γ-生育酚甲基轉移酶基因在油料作物的轉基因工作中的應用。

7.權利要求1或2所述的白沙蒿γ-生育酚甲基轉移酶基因在牧草作物的轉基因工作中的應用。

8.權利要求1或2所述的白沙蒿γ-生育酚甲基轉移酶基因在在除權利要求4或5所述的植物外的植物中的轉基因工作中的應用。

9.權利要求1或2所述的白沙蒿γ-生育酚甲基轉移酶基因在在除植物外的其它生物的轉基因工作中的應用。