[發明專利]一種雙水相萃取葛根中總黃酮的方法

有效

• 申請號: 201110280671.4
• 申請日: 2011-09-21
• 公開（公告）號: CN102319282A
• 公開（公告）日: 2012-01-18
• 發明（設計）人: 池汝安;張越非;余軍霞
• 申請（專利權）人: 武漢工程大學
• 主分類號: A61K36/48
• 分類號: A61K36/48;A61P9/06;A61P9/10;A61P9/12
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102
• 代理人: 崔友明

技術領域

本發明屬于天然產物有效成分的分離純化領域，具體的講是涉及一種雙水相萃取葛根中總黃酮的方法。

背景技術

葛根別名鹿藿、雞齊，為野葛或粉葛的干燥根，是常用的中藥材，歷代以來本草均有記載，味甘、辛、性平，具有解肌退熱、生津、透疹、溫陽止瀉、提高機體免疫力等功能。目前，葛根廣泛用于改善心腦血管。治療腹瀉、糖尿病等重要復方制劑中，用量極大，是制劑的重要成分。《中華人民共和國藥典》和《衛生部藥品標準》中收錄大約有140余種葛根復方制劑，其中主要有葛根片劑、針劑等。實際上葛根主要有效成分為葛根總黃酮，尤其野葛含葛根總黃酮較多，主要作為葛根制劑、藥品、保健品等的原料。黃酮類化合物具有抗癌抗腫瘤、抗心腦血管疾病、抗過敏、抗輻射、抗炎抑菌、抗病毒、抗氧化、抗突變、以及增強免疫能力等廣泛的生理活性。能防治心腦血管系統的疾病和呼吸系統的疾病等，如對治療冠心病、心絞痛、高血壓等有顯著效果，對防治心肌梗塞、心肌缺血，心律失常等也起重要療效。葛根黃酮廣泛應用于醫藥、食品、化妝品等工業中，且因其毒性較低及顯著獨特的生物活性，還被應用到保健食品方面，即用作食品、化妝品的天然添加劑，如食用色素、甜味劑、抗氧化劑等。葛根多糖由于獨特的生理活性也備受人們青睞。

葛根中含有的黃酮類化合物多以糖苷的形式存在，一般提取時多采用水、甲醇、乙醇溶液做提取溶劑，用正丁醇做萃取劑。另據報道，有人采用大孔吸附樹脂的方法提取分離黃酮類化合物，采用正丁醇萃取，使用的溶劑毒性較大，而且需重復三次，操作繁瑣；采用大孔吸附樹脂，前處理方法復雜，而且提取率較低，費時。

雙水相萃取技術（Aqueous?two-phase?extraction,?ATPS）又稱水溶液兩相分配技術，是近年來出現的引人注目，極有前途的新型分離技術。ATPE技術始于20世紀60年代，從1956年瑞典倫德大學Albertsson發現雙水相體系到1979年德國GBF的Kula等將雙水相萃取分離技術應用于生物產品分離，雖然只有二、三十年的歷史，但由于其條件溫和，質量傳輸快，成本低，易操作，可調節，容易放大，可連續操作等特點，與傳統的有機溶劑萃取體系相比較，雙水相萃取體系在生物物質的分離中有獨到的優越之處。迄今，雙水相體系已經在生物化學、細胞生物學、生物化工等有機物分離提純方面得到了較為廣泛的應用。傳統的高聚物/高聚物或高聚物/無機鹽雙水相體系，已經成功用于分離和提取各種蛋白質（多肽和酶），分離和提取各種抗生素、氨基酸、金屬和中藥的有效成份等領域。

在生物物質分離過程中得到應用的雙水相系統有兩類，一類是聚合物和聚合物雙水相體系，一類是聚合物和無機鹽雙水相體系。因為所用的聚合物無毒性，已被許多國家的藥典所收錄，而且其多元醇、多元糖結構能使生物大分子穩定，但在實際應用中這兩類雙水相系統各有優缺點，這兩種體系對生物活性物質變性作用低，界面吸附少，但是所用的聚乙二醇（簡稱PEG）和葡聚糖（簡稱Dextran）成本太高，而且體系黏度大，影響工業規模應用的進展，目前真正工業化的例子還很少。因此，開發廉價的雙水相體系則成了雙水相萃取分離技術發展的方向。

當能與水混溶的普通的有機溶劑，如乙醇、異丙醇、丙酮等，加入到某些電解質水溶液中，利用鹽離子的水化作用，使鹽離子奪取原來與有機溶劑水合的水分子而釋放出有機溶劑分子，可形成有機溶劑/無機鹽雙水相體系。當生物物質或天然產物中的有效成分進入雙水相體系時，由于表面性質、電荷作用和各種力（憎水鍵、氫鍵和離子鍵）的存在和環境因素（濃度、溫度、pH?值以及離子的種類和強度等）的影響，生物物質或天然產物中的有效成分易在兩相間形成選擇性的分配。利用這一點，可以實現生物物質和天然產物中有效成分的提取、濃縮和分離。這類新型的萃取體系，在眾多領域中表現出廣闊的應用前景，中草藥有效成分分子中多具有疏水性結構，因此雙水相萃取技術在中草藥有效成分分離純化中應用是當前研究的熱門。

發明內容

???本發明所要解決的技術問題是針對現有技術而提供了一種雙水相萃取葛根中總黃酮的方法，其不但避免了有毒溶劑的使用，提高了葛根中總黃酮的提取率，且能將粗提品中的黃酮與多糖進行分離，達到純化葛根黃酮的目的，且方法本身操作簡單經濟。

本發明解決上述技術問題所采用的技術方案為：一種雙水相萃取葛根中總黃酮的方法，包括有以下步驟：

1）固液浸提：將葛根藥材粉碎，加入浸取劑，葛根藥材與浸取劑固液比為1g∶5ml-?1g∶30ml，加熱回流提取三次，每次1小時，合并三次提取后的濾液，得到葛根粗提液；