[發明專利]一種以聚聯乙炔傳感器為基礎的藥物-膜親和力測定方法

無效

• 申請號: 201110279408.3
• 申請日: 2011-09-20
• 公開（公告）號: CN102435572A
• 公開（公告）日: 2012-05-02
• 發明（設計）人: 鄭楓;陳夷花
• 申請（專利權）人: 中國藥科大學
• 主分類號: G01N21/33
• 分類號: G01N21/33;G01N21/35
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種以聚聯乙炔光化學傳感器為基礎的藥物-膜親和力測定方法，其特征在于將聯乙炔分子聚合成聚聯乙炔雙分子層，插入磷脂，從而構成類細胞膜的聚聯乙炔/磷脂變色囊泡。

2.如權利要求1所述的一種能用于測定藥物-膜親和力的聚聯乙炔/磷脂變色囊泡，其特征在于所述的聚聯乙炔雙分子層由聯乙炔結構單體(H₃C-(CH₂)_m·C≡C-C≡C-(CH₂)_n-COOH)聚合而成，其中m＝0～10，n＝17～30；所述的磷脂為卵磷脂、腦磷脂、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酰甘油、心磷脂或鞘磷脂。

3.如權利要求1所述的一種能用于測定藥物-膜親和力的聚聯乙炔/磷脂變色囊泡的制備方法，其特征在于：將磷脂與聯乙炔結構單體分別溶于有機溶劑中，混合后在溫水浴中減壓旋蒸除去有機溶劑，然后加入適量去離子水，超聲使其混勻，在4℃中靜置12小時后取出，在紫外光燈下邊攪拌邊照射，即形成藍色的聚聯乙炔/磷脂變色囊泡混懸液。

4.如權利要求3所述的一種能用于測定藥物-膜親和力的聚聯乙炔/磷脂變色囊泡的制備方法，其特征在于：所述的磷脂與聯乙炔結構單體的摩爾比為1∶4～4∶1，紫外光照射波長為220～260nm。

5.一種藥物-膜親和力的評價體系，包括以下步驟：

(1)制備聚聯乙炔/磷脂變色囊泡；

(2)取囊泡混懸液，加入不同pH值的緩沖液，混勻后溫孵，然后分別在藍光吸收波長處和紅光吸收波長處測定其吸收度，計算藥物加入之前的囊泡藍光分數PB₀＝A_藍光/(A_藍光+A_紅光)，A_藍光是囊泡在藍光吸收波長處的吸收度，A_紅光是囊泡在紅光吸收波長處的吸收度；

(3)取囊泡混懸液，加入不同pH值的緩沖液，再加入一定量已知濃度的藥物，混勻后溫孵，然后分別在藍光吸收波長處和紅光吸收波長處測定其吸收度，計算藥物加入之后的囊泡藍光分數PB₁＝A_藍光/(A_藍光+A_紅光)，A_藍光是囊泡在藍光吸收波長處的吸收度，A_紅光是囊泡在紅光吸收波長處的吸收度；

(4)計算變色響應值CR，CR＝(PB₀-PB₁)/PB₀×100％，PB₀是藥物加入之前囊泡的藍光分數，PB₁是藥物加入之后囊泡的藍光分數。

(5)測定加入不同濃度的藥物后囊泡的變色響應值CR，繪制藥物濃度-變色響應值曲線；

(6)運用受體-變色響應的親和力模型，采用一定的數學處理方法，對藥物濃度-變色響應值曲線進行擬合，求算藥物與囊泡的親和力K_b，從而實現建立本發明所述的藥物-膜親和力評價體系。

6.根據權利要求5所述藥物-膜親和力的評價體系，其特征在于：(2)、(3)所述的藍光吸收波長范圍在620～660nm，紅光吸收波長范圍在520～560nm，pH值范圍在7.0～8.5。

7.根據權利要求5所述藥物-膜親和力的評價體系，其特征在于：(6)所述的受體-變色響應的親和力模型為：

CRCRmax=[PR][R]T]]>

[R]_T代表囊泡上磷脂總濃度，[PR]代表藥物與磷脂結合物的濃度，CR代表囊泡加入藥物后的變色響應，CR_max代表囊泡上磷脂全部與藥物結合后的變色響應。

8.根據權利要求5所述藥物-膜親和力的評價體系，其特征在于：(6)所述的數學處理方法包括：

(1)線性擬合方法

1CR=1Kb·CRmax·1[P]+1CRmax]]>

[P]為藥物的濃度，CR代表囊泡加入藥物后的變色響應，CR_max代表囊泡上磷脂全部與藥物結合后的變色響應。K_b用于表示藥物與磷脂的親和力，K_b越大，表明藥物與磷脂的親和力越大，反之，則表明藥物與磷脂的親和力越小。

以1/CR對1/[P]作圖，獲得線性方程的截距與斜率，親和力K_b＝截距/斜率。

(2)非線性擬合方法

CR=1/Kb+[R]T+[P]-(1/Kb+[R]T+[P])2-4[R]T[P]2[P]·CRmax]]>

[P]為藥物的濃度，[R]_T代表囊泡上磷脂總數，CR代表囊泡加入藥物后的變色響應，CR_max代表囊泡上磷脂全部與藥物結合后的變色響應。K_b用于表示藥物與磷脂的親和力，K_b越大，表明藥物與磷脂的親和力越大，反之，則表明藥物與磷脂的親和力越小。

在專業軟件中編輯上述非線性方程，以CR對[P]進行非線性擬合，獲得K_b值。