[發(fā)明專利]一種雷公藤甲素前藥的制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110279102.8
• 申請(qǐng)日: 2011-09-20
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102432866A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-05-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 任天斌;劉昌進(jìn);李建波
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 同濟(jì)大學(xué)
• 主分類號(hào): C08G65/48
• 分類號(hào): C08G65/48;A61P35/00
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司 31200
• 代理人: 張磊

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于高分子材料和生物醫(yī)學(xué)工程領(lǐng)域，具體涉及一種雷公藤甲素前藥的制備方

法。

背景技術(shù)

雷公藤甲素是雷公藤的主要有效成分，具有抗炎、免疫抑制、抗生育、抗腫瘤和白血病治療等多種藥理租用，在臨床上用于治療器官移植的排斥反應(yīng)、自身免疫性疾病、腎病綜合癥等方面療效顯著，同時(shí)還可用于風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、跌打損傷、腎小球腎炎、紅斑狼瘡、腎病綜合癥等疑難病癥的治療。然而直接口服雷公藤甲素不僅藥物代謝快，半衰期短，而且副作用大，不具有選擇性，不良反應(yīng)多，主要有胃腸道反應(yīng)、月經(jīng)紊亂和骨髓抑制等。為了提高療效、減輕毒副反應(yīng)，開(kāi)發(fā)一種有選擇性殺死細(xì)胞的雷公藤甲素藥物具有重要意義。

巰基-二硫鍵交換反應(yīng)快速、可逆，在保持活體細(xì)胞的諸多生物功能方面（如蛋白結(jié)構(gòu)、酶活性、氧化-還原平衡等）發(fā)揮著非常重要的作用。谷胱甘肽是一種由三個(gè)氨基酸組成的含巰基的小分子肽，有還原型（GSH）和氧化型（GSSG）兩種形式，它們是動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)最主要的氧化-還原對(duì)，在生理?xiàng)l件下絕大多數(shù)以還原型谷胱甘肽的形式存在，谷胱甘肽還原酶催化兩型間的互相轉(zhuǎn)變。在線粒體、細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核、分泌途徑和細(xì)胞外空間中，GSH/GSSG之間保持著一種獨(dú)特的非平衡態(tài)。還原型谷胱甘肽（GSH）在人體各部位的濃度差別很大，例如在體液（如血液）和細(xì)胞外只有2~20uM，細(xì)胞內(nèi)部卻可以達(dá)到為0.5mM以上，而腫瘤細(xì)胞內(nèi)部的濃度更是正常細(xì)胞的至少4倍以上。腫瘤細(xì)胞內(nèi)高濃度GSH的存在，為其創(chuàng)造了一種獨(dú)特的內(nèi)部還原性環(huán)境，這就為二硫鍵連接的聚合物提供了相應(yīng)的信號(hào)，因此針對(duì)細(xì)胞內(nèi)藥物傳遞的還原敏感性聚合物膠束的研究逐漸變得引人注意。例如，?Zhong等人制備了以生物大分子葡聚糖（Dextran）作為親水鏈的兩嵌段共聚物（Dextran-S-S-PCL），（Biomacromolecules,?2010,?11(4):?848-854）；?Li等人則制備了以聚亮氨酸為疏水鏈段的兩嵌段共聚物（PEG-S-S-Pleu）（Polymer,?2011,?52(16):?3580-3586）。

本發(fā)明制備的一種雷公藤甲素前藥，在聚乙二醇的兩端通過(guò)二硫鍵連接上雷公藤甲素，在一般的體液環(huán)境中是穩(wěn)定存在，雷公藤甲素由于疏水性構(gòu)成疏水內(nèi)核，外殼為親水性的聚乙二醇，一旦到達(dá)病變位置，由于還原環(huán)境的刺激，二硫鍵開(kāi)始斷裂，從而快速釋放出內(nèi)核中的雷公藤甲素，從而提高了藥物的治療效果，減輕毒副作用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種雷公藤甲素前藥的制備方法。

本發(fā)明的目的是在聚乙二醇的兩端通過(guò)二硫鍵連接上雷公藤甲素，使其具有良好的環(huán)境響應(yīng)性，提高藥物的治療效果，減輕毒副作用。

本發(fā)明提供的一種雷公藤甲素前藥的制備方法，具體步驟如下：

將聚乙二醇（分子量1000~10000）加入反應(yīng)釜，并分散溶解在溶劑二甲亞砜（DMSO）

中，加入重量百分?jǐn)?shù)40%的苛性堿A水溶液，常溫?cái)嚢璺磻?yīng)0.5~3小時(shí)后，加入聚乙二醇端羥基總摩爾數(shù)的5~10倍量的氯乙酸，反應(yīng)溫度為50~80℃，反應(yīng)時(shí)間為24~48小時(shí)，調(diào)節(jié)PH至中性，抽濾，濃縮溶劑，在去離子水中透析，凍干，得到兩端含有端羧基的聚乙二醇；將所得到的兩端含有端羧基的聚乙二醇溶于溶劑無(wú)水二氯甲烷中，加入聚乙二醇端羥基總摩爾數(shù)1~5倍量的N,N'-二環(huán)己基碳二亞胺（DCC），并按照N,N'-二環(huán)己基碳二亞胺（DCC）摩爾數(shù)加入N-羥基琥珀酰亞胺（NHS），體系在氬氣或氮?dú)獗Ｗo(hù)下室溫反應(yīng)，反應(yīng)12~24小時(shí)后，將該溶液緩慢滴加至聚乙二醇端羥基總摩爾數(shù)的5~10倍量的胱胺的二氯甲烷溶液中，室溫反應(yīng)，反應(yīng)時(shí)間為12~24小時(shí)，經(jīng)抽濾，沉淀，濃縮溶劑，在去離子水中透析，凍干，得到含端氨基的聚乙二醇；將該含端氨基的聚乙二醇的氨基總數(shù)的1.5~3倍量的羧基化的雷公藤甲素加入另一反應(yīng)釜，并分散溶解在溶解二甲亞砜（DMSO）中，加入聚乙二醇的氨基總數(shù)的1~5倍量的N,N'-二環(huán)己基碳二亞胺（DCC），并按照N,N'-二環(huán)己基碳二亞胺（DCC）摩爾數(shù)加入N-羥基琥珀酰亞胺（NHS），體系在氬氣或氮?dú)獗Ｗo(hù)下室溫反應(yīng)，反應(yīng)12~24小時(shí)后，將含端氨基的聚乙二醇的二甲亞砜溶液緩慢滴加至上述溶液中，室溫反應(yīng)，反應(yīng)時(shí)間為12~24小時(shí)，經(jīng)抽濾，沉淀，濃縮溶劑，用在去離子水中透析，凍干，即得到所需產(chǎn)物。

本發(fā)明中，所述苛性堿A為氫氧化鈉或氫氧化鉀中的一種或兩種。

本發(fā)明中，所述的羧基化的雷公藤甲素的制備方法如下：