[發明專利]促造血的藥物組合物及其應用有效

申請號：	201110279039.8	申請日：	2011-09-19
公開（公告）號：	CN102671186A	公開（公告）日：	2012-09-19
發明（設計）人：	鄒剛明;陳維凱;劉長龍;姜少杰;丁華偉;王繼峰	申請（專利權）人：	上海市腫瘤研究所
主分類號：	A61K38/19	分類號：	A61K38/19;C12N5/0789;A61P7/06;A61P35/00
代理公司：	上海精晟知識產權代理有限公司 31253	代理人：	何新平
地址：	200032 上海***	國省代碼：	上海;31
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摘要：
搜索關鍵詞：	造血藥物組合及其應用
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【權利要求書】：

1.一種促造血的藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物中包含有細胞因子LIGHT。

2.根據權利要求1所述的促造血的藥物組合物，其特征在于，細胞因子LIGHT通過結合造血干、祖細胞表面的LIGHT受體HVEM和LT-βR，上調髓系轉錄因子PU.1，促進GM-CSF和GM-CSFR表達。

3.一種通過權利要求1所述的促造血的藥物組合物中促造血細胞因子進行促進粒單系祖細胞生長的方法，其特征在于，進行體外促進粒單系祖細胞生長的方法包括如下步驟：在適合粒單系祖細胞生長的甲基纖維素培養基中培養粒單系祖細胞，所述的培養基含有100ng/ml的細胞因子LIGHT。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，進行體外促進粒單系祖細胞生長的方法包括如下步驟：注射包含細胞因子LIGHT的促造血的藥物組合物。

5.根據權利要求3或4所述的方法，其特征在于，細胞因子LIGHT溶解于0.1％的BSA溶液/鹽水。

6.一種應用MOFLO?XDP系統從骨髓單個核細胞中分離造血干細胞、共同髓系祖細胞(CMP)和粒-單系祖細胞(GMP)的方法，其特征在于，它包括如下步驟：

步驟一、分離骨髓單個核細胞，并重懸于含2％FCS的PBS溶液中；

步驟二、加入適量FCS，冰浴封閉15分鐘；

步驟三、取8只FALCON管，其中1只為同型對照染色管，6只為單染管，最后1只為分選細胞管，加入6種熒光標記的抗體：FITC-conjugated?Lineage?antibody?Cocktail(BioLegend，San?Diego，USA)；PerCP/Cy5.5-conjugated?Sca-1?antibody(BioLegend，San?Diego，USA)；APC-conjugated?c-kit?antibody(BioLegend，San?Diego，USA)；PE/Cy7-conjugated?IL-7Rαantibody(BioLegend，San?Diego，USA)；V450-conjugated?FcγR?III/II?antibody(BD?Horizon^TM)；Alexa?700-conjugated?CD34?antibody(eBioscience，San?Diego，USA)；同型對照染色管加入6種相對應的同型對照抗體，6只單染管分別加入其中一種熒光標記抗體和其余5種同型對照抗體，渦旋振蕩器混勻，冰浴避光染色15分鐘；

步驟四、用含有2mM?EDTA的2％FCS/PBS溶液洗滌、離心、去上清，重懸于2％FCS/PBS溶液中，上Moflo?XDP?cell?sorter分選，設定Lin^-Sca-1⁺c-kit⁺細胞群為HSC，IL-7Rα^-Lin^-Sca-1^-c-kit⁺CD34⁺FcγR^low細胞群為CMP，IL-7Rα^-Lin^-Sca-1^-c-kit⁺CD34⁺FcγR^hi細胞群為GMP。