[發(fā)明專利]一種白芷揮發(fā)油成分的GC/MS指紋圖譜的分析方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110278152.4
• 申請日: 2011-09-19
• 公開（公告）號: CN102435683A
• 公開（公告）日: 2012-05-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉娜;肖茜云
• 申請（專利權(quán)）人: 天津春發(fā)生物科技集團有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 天津濱海科緯知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 12211
• 代理人: 李莉華

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及中藥白芷的分析測試領(lǐng)域，特別是涉及白芷揮發(fā)油成分的分析檢測方法。

背景技術(shù)

白芷始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，是傳統(tǒng)中藥之一，為傘形科當(dāng)歸屬植物白芷(Angelica?dahurica)或杭白芷(Angelca?dahurica?var.formosana)的干燥根。白芷為白芷商品藥材的主流品種，約占全國商品白芷產(chǎn)量的70％。白芷性溫，味辛，有散風(fēng)寒、燥濕、排膿、止痛的功能，用于風(fēng)寒感冒、頭痛、鼻炎、牙痛等。白芷含揮發(fā)油，香豆素及其衍生物，如當(dāng)歸素、白當(dāng)歸醚、歐前胡乙素、白芷毒素等，揮發(fā)油中有3-亞甲基-6-環(huán)己烯、十一炭烯-4、欖香烯、十六烷酸、壬烯醇等。

白芷的產(chǎn)地加工方法對白芷質(zhì)量影響較大，目前主要采用硫磺煙熏法，但是，大量實驗證實熏硫后其香豆素及揮發(fā)油類成分大大降低，白芷的藥效不穩(wěn)定，因此控制白芷藥材質(zhì)量至關(guān)緊要。

關(guān)于白芷質(zhì)量控制方法的報道有：《中國藥典》2000年版對白芷藥材的質(zhì)量控制只限于原植物品種、藥材性狀和簡單的理化鑒別，缺乏一套行之有效的內(nèi)在質(zhì)量控制方法和量化指標(biāo)。聶紅，沈映君，白芷揮發(fā)油的GC-MS分析，貴陽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2002年6月第24卷第2期，公開了一種白芷揮發(fā)油的GC-MS分析方法；馬逾英、王娜，不同前處理方法所得白芷揮發(fā)油成分的GC-MS分析，成都中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2009年12月第32卷第4期，也公開了一種白芷揮發(fā)油的GC-MS分析方法，但是它們都沒有對白芷揮發(fā)油的建立系統(tǒng)可靠的指紋圖譜分析方法，不能有效地控制白芷揮發(fā)油的質(zhì)量。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種白芷揮發(fā)油成分的GC/MS指紋圖譜的分析方法，用于白芷揮發(fā)油的質(zhì)量評價，為白芷揮發(fā)油的質(zhì)量控制和產(chǎn)地鑒定提供有效地途徑。

本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的：

一種白芷揮發(fā)油成分的GC/MS指紋圖譜的分析方法，包括以下步驟：

1、揮發(fā)油的提取

白芷：蒸餾水(體積比)＝1∶8～15，浸泡10～15h，回流提取至餾出液無明顯油珠為止；將流出液用乙醚萃取，用無水硫酸鈉等無水無機鹽干燥萃取液，去除乙醚，即得白芷揮發(fā)油。

優(yōu)選地，乙醚萃取液的用量為流出液與乙醚的體積比為1∶6；

優(yōu)選地，萃取中至少用乙醚進行兩次萃取；

優(yōu)選地，干燥后的萃取液在50℃水浴下?lián)]發(fā)去除乙醚。

2、白芷揮發(fā)油化學(xué)成分的GC/MS分析

1)揮發(fā)油溶于乙醚中供GC/MS分析使用；

2)設(shè)置氣相色譜條件：HB-5毛細管柱(30m×0.25μm×0.25μm)，進樣口溫度250℃，載氣為高純氦氣，載氣流速為1.0mL/min，程序升溫：起始溫度40℃，保持3.0min，3℃/min升至80℃，保持1min，再以15℃/min升至230℃保持5.0min，進樣1μL。

3)設(shè)置質(zhì)譜條件：EI離子源；電子能量70eV；四級桿溫度150℃，接口溫度260℃；電子倍增器電壓1654V；離子源溫度230℃；采用標(biāo)準(zhǔn)方式調(diào)諧；選用全掃描(SCAN)模式，質(zhì)量掃描范圍：45～550amu。

3、對白芷揮發(fā)油進行GC/MS分析，得到揮發(fā)油的GC/MS總離子流圖。通過質(zhì)譜數(shù)據(jù)系統(tǒng)檢索，鑒定化合物，并對各組分的相對含量采用峰面積歸一化法進行定量。

4、指紋圖譜的建立

4.1指紋圖譜的制備方法

將3～5批次白芷提取揮發(fā)油后得供試品溶液，分別進行GC/MS測定，記錄總離子流圖。

4.2共有峰的確定

對所有批次測定的GC/MS總離子流圖進行對比，篩選出強度較大的共有峰，選擇其中色譜峰分離度好、強度高的峰為參照物峰。

5、指紋圖譜的方法學(xué)考察

5.1精密度實驗

取同一試樣溶液，連續(xù)進樣5～10次，比較各共有峰相對保留時間和相對峰面積，計算每個峰的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。

5.2穩(wěn)定性實驗

取同一試樣溶液，分別放置0，2，4，8，16，24h后進樣測定，比較各共有峰相對保留時間和相對峰面積，計算每個峰的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。

5.3重現(xiàn)性實驗

取同一批白芷揮發(fā)油5～10份，制備平行試樣溶液，進樣，計算每個峰的相對保留時間和相對峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。

本發(fā)明所具有的有益效果：