[發明專利]一種用人工蛋白類熒光探針對活細胞進行細胞質特異性標記的方法

無效

• 申請號: 201110277673.8
• 申請日: 2011-09-19
• 公開（公告）號: CN102994607A
• 公開（公告）日: 2013-03-27
• 發明（設計）人: 相艷;司江菊;武素芳
• 申請（專利權）人: 北京航空航天大學
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02
• 代理公司: 北京金恒聯合知識產權代理事務所 11324
• 代理人: 李強

1.一種用人工蛋白類熒光探針對活細胞進行細胞質特異性標記的方法，其特征在于包括：

配制氨基酸-殼聚糖多肽類接枝共聚物懸液；

將配制好的接枝共聚物懸液分散于DMEM高糖培養液中；

用乙二胺四乙酸-胰蛋白酶把中國倉鼠肺成纖維細胞細胞消化為單細胞懸液；

孵育所述中國倉鼠肺成纖維細胞細胞；

棄掉原液；

加入分散有接枝共聚物懸液的所述DMEM高糖培養液；

繼續培養預定的時間。

2.根據權利要求1的方法，其特征在于進一步包括：

在所述繼續培養預定的時間的步驟之后，在紫外光的激發下，用熒光顯微鏡觀察被蛋白類熒光探針標記的中國倉鼠肺成纖維細胞。

3.根據權利要求1的方法，其特征在于

所述配制氨基酸-殼聚糖多肽類接枝共聚物懸液的步驟包括：

將氨基酸-殼聚糖多肽類接枝共聚物固體粉末通過紫外滅菌后加入適量滅菌水，

所述將配制好的接枝共聚物懸液分散于DMEM高糖培養液中的步驟包括：

用超聲器超聲分散，

將分散好的接枝共聚物水溶液分散于DMEM高糖培養液中。

4.根據權利要求3的方法，其特征在于

在所述用超聲器超聲分散的步驟中，保持超聲器每工作一定時間后停歇一個預定時間。

5.根據權利要求1的方法，其特征在于

所述用乙二胺四乙酸-胰蛋白酶把中國倉鼠肺成纖維細胞消化為單細胞懸液的步驟包括：

用DMEM高糖培養液培養中國倉鼠肺成纖維細胞，培養至細胞鋪滿培養瓶一個預定比例以上時，用乙二胺四乙酸-胰蛋白酶消化為單細胞懸液，

所述孵育所述中國倉鼠肺成纖維細胞的步驟包括：

在培養箱中孵育，使細胞正常貼壁生長，得到所需的細胞生長狀態。

6.根據權利要求2的方法，其特征在于進一步包括：

在所述用熒光顯微鏡觀察被蛋白類熒光探針標記的中國倉鼠肺成纖維細胞的步驟之前，用磷酸緩沖液沖洗掉殘留的蛋白類熒光探針。

7.根據權利要求5的方法，其特征在于：

所述乙二胺四乙酸-胰蛋白酶的體積比為0.25％，

所述在培養箱中孵育的步驟是在37℃、5％體積分數的CO₂環境下進行。