[發明專利]一種利用黃芩毛狀根生產黃芩苷的方法

有效

• 申請號: 201110276345.6
• 申請日: 2011-09-16
• 公開（公告）號: CN102311469A
• 公開（公告）日: 2012-01-11
• 發明（設計）人: 齊香君;李雅;張雯;郭樂康;陳秀清
• 申請（專利權）人: 陜西科技大學
• 主分類號: C07H17/07
• 分類號: C07H17/07;C07H1/08;A01H4/00
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司 61200
• 代理人: 陸萬壽

技術領域

本發明屬于黃芩苷的人工培育及生產技術領域，涉及一種利用黃芩毛狀根生產黃芩苷的方法。

背景技術

黃芩苷為黃芩的主要有效成分，是評價黃芩質量重要的指標之一。現代藥理學研究表明，黃芩苷具有清除氧自由基及抗氧化、免疫調節、抗炎、抗菌與抗腫瘤作用，特別是近年國際上關于黃芩苷在抗HIV方面的研究，使得黃芩苷的產品開發呈上升之勢。隨著對黃芩苷研究的深入，市場需求不斷擴大。利用生物技術生產黃芩苷，保護黃芩野生資源，滿足市場需求具有廣闊的前景。研究表明黃芩屬黃芩毛狀根可以有效合成黃芩苷等藥用成分。進行黃芩毛狀根離體培養生產次生代謝產物黃芩苷，是黃芩苷產品可持續發展的有效途徑之一。

發明內容

本發明解決的問題在于提供一種利用黃芩毛狀根生產黃芩苷的方法，提高黃芩毛狀根的生物生成量，經過提取之后獲得高純度的黃芩苷，為藥用成分黃芩苷工業化生產提供新技術。

本發明是通過以下技術方案來實現：

一種利用黃芩毛狀根生產黃芩苷的方法，包括以下步驟：

1)按照5～8g/L的接種量，將黃芩毛狀根接種到種子培養基，110r/min、25～28℃避光培養15～40d，獲得黃芩毛狀根種子；所述的種子培養基為添加30～50g/L葡萄糖或蔗糖、0～0.3mmol/L苯丙氨酸的MS培養液；

再按照5～10g/L接種量，將毛狀根種子接種于發酵培養基，110r/min、20～28℃避光培養20～30d，收獲黃芩毛狀根；所述的發酵培養基為添加0.4～0.7mmol/L苯丙氨酸、50～70g/L蔗糖或葡萄糖的MS培養液；

2)將收獲的黃芩毛狀根加入到其質量10～20倍的水中，煎煮90～120min，過濾收集濾液并濃縮，然后調節其pH為1.5～2.0，60～80℃保溫30min，靜置后過濾；

將沉淀物用水溶解并調節pH為6.5～7.0，再添加1～3倍體積的乙醇，過濾收集濾液并調節pH為7.5～8.5，靜置后過濾；

將濾液調pH為1.5～2.0，60～80℃保溫30min，靜置，過濾，乙醇洗滌沉淀物，干燥后得到黃芩苷。

所述的黃芩毛狀根種子培養級數由發酵培養的規模確定，分為兩級培養：

按照5～8g/L的接種量，將黃芩毛狀根接種到種子一級培養基，110r/min、25～28℃避光培養15～20d，獲得黃芩毛狀根一級種子；按照5～10g/L的接種量，將黃芩毛狀根一級種子接種到種子二級培養基，110r/min、25～28℃避光培養15～18d獲得毛狀根二級種子；

所述的種子一級培養基為添加30～50g/L葡萄糖或蔗糖的MS培養液，種子二級培養基為添加30～50g/L葡萄糖或蔗糖、0.1～0.3mmol/L苯丙氨酸的MS培養液。

所述的毛狀根種子接種于發酵培養基之后，在前18～22d在26～28℃培養，在后2～12d在20～22℃培養。

所述的將黃芩毛狀根煎煮之后的濾液濃縮1/3～2/3。

與現有技術相比，本發明具有以下技術效果：

1、本發明公開的黃芩毛狀根生產黃芩苷的工藝，首先通過培養條件的優化，尤其是有利于黃芩苷生長的前體苯丙氨酸的添加和碳源的改善，大大的提高了黃芩次生代謝產物產量，且不受自然條件影響、不占用土地、產品質量可控，無農藥殘留；然后再通過堿提酸沉的提取工藝進行黃芩苷的提取，能夠獲得高產量、高純度的黃芩苷：黃芩苷提取率為15～18％，精制后黃芩苷純度為85～95％。

2、本發明公開的黃芩毛狀根生產黃芩苷的工藝，所得黃芩毛狀根黃芩苷的含量高達17.60～21.45％，顯著高于文獻報道的黃芩道地藥材(產地：河北承德)黃芩苷的最高含量12.05±1.73％，也顯著高于2010版藥典中藥用黃芩含黃芩苷(C₂₁H₁₈O₁₁)不得少于9.0％的規定。

3、本發明公開的黃芩毛狀根生產黃芩苷的工藝，由于其培養條件的改善，黃芩毛狀根生產周期較短(為50～68d/批)，在工業生產中可操作性強，通過毛狀根生產黃芩苷產量為2.58kg/m³·月。

附圖說明

圖1是從黃芩毛狀根中提取黃芩苷的工藝流程圖。

具體實施方式