[發明專利]一種水通道蛋白基因在構建與Hpa1Xoo相互作用的互作載體中的應用

無效

• 申請號: 201110275929.1
• 申請日: 2011-09-16
• 公開（公告）號: CN102304542A
• 公開（公告）日: 2012-01-04
• 發明（設計）人: 董漢松;桑素玲;劉昌來;尤真真;徐衡
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: C12N15/81
• 分類號: C12N15/81
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 徐冬濤

1.SEQ?ID?NO.1所示的水通道蛋白基因PIP1；4在構建其表達產物與Hpa1_Xoo相互作用的互作載體中的應用。

2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于所述的互作載體為酵母雙雜交系統中使用的重組載體pGBKT7::PIP1；4，該重組載體是通過以擬南芥生態型Col-0基因組DNA為模板，利用特異性上、下游引物SEQ?ID?No.6和SEQ?ID?No.7克隆SEQ?ID?NO.1所示的PIP1；4基因，經Nde?I/BamH?I雙酶切后插入到pGBKT7質粒的Nde?I/BamH?I酶切位點之間所得。

3.根據權利要求1所述的應用，其特征在于所述的互作載體為酵母雙雜交系統中使用的重組載體pGADT7::PIP1；4，該重組載體是通過以擬南芥生態型Col-0基因組DNA為模板，利用特異性上、下游引物SEQ?ID?No.6和SEQ?ID?No.7克隆SEQ?ID?NO.1所示的PIP1；4基因，經Nde?I/BamH?I雙酶切后插入到pGADT7質粒的Nde?I/BamH?I酶切位點之間所得。

4.根據權利要求1所述的應用，其特征在于所述的互作載體為膜酵母雙雜交系統中使用的重組載體pBT3-N::PIP1；4，該重組載體是通過以權利要求3所述的重組載體pGADT7::PIP1；4為模板，利用特異性上、下游引物SEQ?ID?No.12和SEQ?ID?No.13克隆得到PIP1；4基因，Sfi?I酶切后連接到pBT3-N質粒的Sfi?I酶切位點所得。

5.根據權利要求1所述的應用，其特征在于所述的互作載體為膜酵母雙雜交系統中使用的重組載體pBT3-STE::PIP1；4，該重組載體是通過以權利要求3所述的重組載體pGADT7::PIP1；4為模板，利用特異性上、下游引物SEQ?ID?No.14和SEQ?ID?No.15克隆得到PIP1；4基因，Sfi?I酶切后連接到pBT3-STE質粒的Sfi?I酶切位點所得。

6.根據權利要求1所述的應用，其特征在于所述的互作載體為Pull-down?assay中使用的表達水通道蛋白PIP1；4的重組載體pPICZ-A::PIP1；4，該重組載體是通過以權利要求3所述的重組載體pGADT7::PIP1；4為模板，利用特異性上、下游引物SEQ?ID?No.16和SEQ?ID?No.17克隆得到PIP1；4基因，經EcoR?I/Kpn?I酶切后連接到酵母胞內表達載體pPICZ-A上的EcoR?I/Kpn?I酶切位點之間所得。

7.根據權利要求1所述的應用，其特征在于所述的互作載體為Pull-down?assay中使用的表達水通道蛋白PIP1；4的重組載體pPICZα-A::PIP1；4，該重組載體是通過以權利要求3所述的重組載體pGADT7::PIP1；4為模板，利用特異性上、下游引物SEQ?ID?No.18和SEQ?ID?No.19克隆得到PIP1；4基因，經EcoR?I/Kpn?I酶切后連接到酵母胞外分泌表達載體pPICZα-A上的EcoR?I/Kpn?I酶切位點之間所得。?

8.根據權利要求1所述的應用，其特征在于所述的互作載體為BiFC雜交系統中使用的重組載體pCAMBIA1301::PIP1；4::YN，該重組載體是以pPLV17為模板，以SEQ?ID?No.24和SEQ?ID?No.25為引物擴增黃色熒光蛋白氮末端序列YN，將所得的YN使用Xba?I和Pst?I進行酶切并插入到pCAMBIA1301相應的酶切位點獲得pCAMBIA1301::YN載體；以擬南芥生態型Col-0基因組DNA為模板，以SEQ?ID?No.28和SEQ?ID?No.29為引物擴增PIP1；4，將擴增的到得PIP1；4基因使用Kpn?I和BamH?I雙酶切后插入到pCAMBIA1301::YN載體的Kpn?I和BamH?I酶切位點間得到的。?