[發(fā)明專利]口蹄疫純化疫苗及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110275159.0
• 申請(qǐng)日: 2011-09-19
• 公開（公告）號(hào): CN102988970A
• 公開（公告）日: 2013-03-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐樹蘭;張海艷;李少英;趙炳武;辛俊寶;張澍;王欽富;武華
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 內(nèi)蒙古必威安泰生物科技有限公司
• 主分類號(hào): A61K39/135
• 分類號(hào): A61K39/135;A61K9/107;A61P31/14;C12N7/02
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;費(fèi)碧華

1.一種口蹄疫純化疫苗的制備方法，其特征在于包括以下步驟：將經(jīng)過細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的口蹄疫病毒液中的細(xì)胞碎片去除后，濃縮至適當(dāng)倍數(shù)，用硫酸魚精蛋白沉淀去除大部分宿主細(xì)胞雜蛋白和核酸，離心，上清液通過聚丙烯酰胺葡聚糖凝膠柱層析進(jìn)行洗脫，收集第一個(gè)洗脫峰，過濾除菌后滅活，加入佐劑進(jìn)行乳化，分裝即得。

2.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于具體包括以下步驟：

(1)將口蹄疫病毒種毒接種懸浮培養(yǎng)的BHK21細(xì)胞，繼續(xù)懸浮培養(yǎng)15～28小時(shí)；

(2)收獲經(jīng)過BHK21細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的口蹄疫病毒，通過微孔過濾系統(tǒng)去除細(xì)胞碎片，得到微濾液；

(3)微濾液濃縮至微濾液原體積的1/10～1/100，得到微濾液的濃縮液；

(4)向步驟(3)得到的濃縮液中加入硫酸魚精蛋白，使硫酸魚精蛋白的終濃度達(dá)到1.0mg/ml～2.5mg/ml，室溫?cái)嚢?.5h～2.0h，靜置作用0.5h～2.0h后，5000rpm～10000rpm離心15min～60min，棄沉淀，取離心上清，得到濃縮口蹄疫病毒上清液；

(5)將聚丙烯酰胺葡聚糖凝膠裝入層析柱，用1～2倍柱體積的PH7.4～8.0的0.01M的磷酸鹽緩沖液平衡層析柱，將步驟(4)離心獲得的濃縮口蹄疫病毒上清液加于聚丙烯酰胺葡聚糖凝膠上面，待病毒液全部進(jìn)入凝膠之后，再用PH7.4～8.0的0.01M磷酸鹽緩沖液進(jìn)行洗脫；

(6)收集第一個(gè)洗脫峰，過濾除菌后用1mM～3mM的BEI?30℃滅活28小時(shí)，滅活液經(jīng)2-10倍稀釋后，按1∶1重量比加礦物油佐劑乳化，分裝得口蹄疫滅活疫苗。

3.如權(quán)利要求1或2所述的制備方法，其特征在于所述的口蹄疫病毒毒株為口蹄疫病毒各血清型疫苗毒株其中至少一種。

4.如權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于步驟(2)中所述的微孔過濾系統(tǒng)為孔徑為5微米，1微米和0.45微米的濾芯一起聯(lián)合使用或者孔徑為5微米，1微米和0.45微米的振動(dòng)篩一起聯(lián)合使用，或者孔徑為5微米，1微米和0.45微米中空纖維柱一起聯(lián)合使用。

5.如權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于步驟(3)中所述的濃縮為使用PEG6000進(jìn)行病毒沉淀濃縮或者使用截留分子量為6kd-20kd的中空纖維柱或者截留分子量為6kd-20kd的膜包進(jìn)行濃縮。

6.如權(quán)利要求1或2所述的制備方法，其特征在于所述的聚丙烯酰胺葡聚糖凝膠為組分收集范圍為1.0×10⁴～1.0×10⁸球蛋白分子量的高分辨率聚丙烯酰胺葡聚糖凝膠。

7.如權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于所述的高分辨率的聚丙烯酰胺葡聚糖凝膠組分收集范圍為1.0×10⁴～1.5×10⁶球蛋白分子量。

8.由權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述的制備方法制備得到的口蹄疫純化疫苗。

9.權(quán)利要求8所述的口蹄疫純化疫苗在制備預(yù)防動(dòng)物口蹄疫疾病藥物中的應(yīng)用。