[發明專利]可用于預防或治療人潰瘍性結腸炎的重組食品級乳酸菌、其制備方法與應用

無效

• 申請號: 201110275102.0
• 申請日: 2011-09-16
• 公開（公告）號: CN102329766A
• 公開（公告）日: 2012-01-25
• 發明（設計）人: 黃亞東;蘇志堅;項琪;張齊好;馮婭
• 申請（專利權）人: 暨南大學;廣州市暨達生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/74;A61K8/99;A61Q19/00;A61K35/74;A61P1/04;A23C9/12;C12R1/01;C12R1/25
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司 11021
• 代理人: 王旭

1.一種表達含人酸性成纖維細胞生長因子的融合蛋白的重組食品級乳酸菌，其通過下述方法制備：構建一種以α-半乳糖苷酶為抗性篩選標記的表達含人酸性成纖維細胞生長因子融合蛋白的重組表達載體，并轉化到乳酸菌宿主細胞中。

2.根據權利要求1所述的重組食品級乳酸菌，其中所述融合蛋白由Usp45蛋白信號肽、促分泌蛋白肽以及人酸性成纖維細胞生長因子組成，其氨基酸序列如SEQ?ID?No：5所示，所用的重組表達載體衍生于pMG36e。

3.根據權利要求1所述的重組食品級乳酸菌，其中所述的乳酸菌宿主細胞選自：乳球菌，例如，乳球菌MG1363、LM0230、MG1614、NZ9000、NZ9700、NZ9800，糞腸球菌，例如，糞腸球菌OGIX、FA2-2，或植物乳桿菌，優選乳酸乳球菌NZ9000。

4.一種制備分泌表達含人酸性成纖維細胞生長因子的融合蛋白的重組食品級乳酸菌的方法，該方法包括以下步驟：

1)構建以α-半乳糖苷酶為抗性篩選標記的表達含人酸性成纖維細胞生長因子融合蛋白的重組表達載體；

2)將1)中構建的重組表達載體電轉化至乳酸菌宿主細胞中，并且用含蜜二糖的乳酸菌培養基篩選轉化成功的重組乳酸菌。

5.根據權利要求4所述的方法，其還包括下述步驟：

3)在適于分泌表達融合蛋白的條件下培養步驟2)中被轉化的重組乳酸菌；和

4)通過3)的重組乳酸菌分泌表達出所述含人酸性成纖維細胞生長因子的融合蛋白。

6.根據權利要求4所述的方法，其中所述融合蛋白由Usp45蛋白信號肽、促分泌蛋白肽以及人酸性成纖維細胞生長因子組成，其氨基酸序列如SEQ?ID?No：5所示，其中步驟1)中所用的重組表達載體衍生于pMG36e。

7.根據權利要求4所述的方法，其中所述的乳酸菌宿主細胞選自：乳球菌，例如，乳球菌MG1363、LM0230、MG1614、NZ9000、NZ9700、NZ9800，糞腸球菌，例如，糞腸球菌OGIX、FA2-2，或植物乳桿菌，優選乳酸乳球菌NZ9000。

8.權利要求1-3中任一項的分泌表達含人酸性成纖維細胞生長因子的融合蛋白的重組食品級乳酸菌在制備化妝品或用于預防和治療人潰瘍性結腸炎的藥物或食品中的應用。

9.一種用于預防和治療人潰瘍性結腸炎的藥物或食品，其中包含有效量的權利要求1-3中任一項所述的分泌表達含人酸性成纖維細胞生長因子的融合蛋白的重組食品級乳酸菌。

10.一種化妝品，其中包含有效量的權利要求1-3中任一項所述的分泌表達含人酸性成纖維細胞生長因子的融合蛋白的重組食品級乳酸菌。