[發(fā)明專利]檢測(cè)他克莫司和環(huán)孢素A個(gè)體化用藥相關(guān)SNP位點(diǎn)的試劑盒及擴(kuò)增方法和檢測(cè)方法無(wú)效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201110274203.6 | 申請(qǐng)日： | 2011-09-16 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN102277443A | 公開(kāi)（公告）日： | 2011-12-14 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 韓俊領(lǐng);杜宏偉;周毓玲;崔麗娟 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 協(xié)和干細(xì)胞基因工程有限公司;天津?yàn)I海協(xié)和基因科技有限公司 |
| 主分類號(hào)： | C12Q1/68 | 分類號(hào)： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 天津才智專利商標(biāo)代理有限公司 12108 | 代理人： | 王曉紅 |
| 地址： | 300384 天津*** | 國(guó)省代碼： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 檢測(cè) 克莫司 環(huán)孢素 個(gè)體化 用藥 相關(guān) snp 試劑盒 擴(kuò)增 方法 | ||
1.一種檢測(cè)他克莫司和環(huán)孢素A個(gè)體化用藥相關(guān)SNP位點(diǎn)的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括檢測(cè)基因CYP3A4?rs2242480?SNP位點(diǎn)的引物、檢測(cè)基因CYP3A5?rs776746?SNP位點(diǎn)的引物及檢測(cè)基因MDR1?rs1045642?SNP位點(diǎn)的引物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)他克莫司和環(huán)孢素A個(gè)體化用藥相關(guān)SNP位點(diǎn)的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括檢測(cè)基因CYP3A4?rs2242480?SNP位點(diǎn)的兩個(gè)正向引物及一個(gè)反向引物、檢測(cè)基因CYP3A5?rs776746?SNP位點(diǎn)的兩個(gè)正向引物及一個(gè)反向引物和檢測(cè)基因MDR1?rs1045642?SNP位點(diǎn)的兩個(gè)正向引物及一個(gè)反向引物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測(cè)他克莫司和環(huán)孢素A個(gè)體化用藥相關(guān)SNP位點(diǎn)的試劑盒，其特征在于，所述檢測(cè)基因CYP3A4?rs2242480位點(diǎn)的引物堿基序列如下所示：
正向野生型引物：tttacccaat?aaggtgagtg?gatgg
正向突變型引物：tttacccaat?aaggtgagtg?gatga
反向共用引物：cctacataga?gtcagtgaaa?gaatcagtga
所述檢測(cè)基因cyp3a5?rs776746位點(diǎn)的引物堿基序列如下所示：
正向野生型引物：atgtggtcca?aacagggaag?agatat
正向突變型引物：atgtggtcca?aacagggaag?agatac
反向共用引物：aggcaacatg?acttagtaga?cagatgaca
所述檢測(cè)基因mdr1?rs1045642位點(diǎn)的引物堿基序列如下所示：
正向野生型引物：cgggtggtgt?cacaggaaga?gatt
正向突變型引物：cgggtggtgt?cacaggaaga?gatc
反向共用引物：gggagagaca?gtcatgccta?cttcct
4.一種權(quán)利要求1所述的檢測(cè)他克莫司和環(huán)孢素A個(gè)體化用藥相關(guān)SNP位點(diǎn)的試劑盒所采用的檢測(cè)方法，其特征在于，對(duì)受檢樣本DNA分別用野生型和突變擴(kuò)增緩沖液進(jìn)行擴(kuò)增，在每個(gè)反擴(kuò)增反應(yīng)中同時(shí)對(duì)3個(gè)目的片段和1個(gè)內(nèi)參片段進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增片段由大到小依次是：內(nèi)對(duì)照733bp，MDR1rs1045642?518bp，CYP3A5?rs776746?303bp，CYP3A4?rs2242480?139bp；擴(kuò)增后經(jīng)凝膠電泳即可在紫外光下見(jiàn)到根據(jù)片段大小區(qū)分開(kāi)的產(chǎn)物條帶，根據(jù)條帶的有無(wú)判斷3個(gè)SNP位點(diǎn)的基因型。
5.一種采用權(quán)利要求1所述的檢測(cè)華法林個(gè)體化用藥相關(guān)SNP位點(diǎn)的試劑盒多重PCR擴(kuò)增方法，其特征在于，
預(yù)變性由1次循環(huán)構(gòu)成，其條件為：溫度為94℃，時(shí)間為5分鐘；
PCR擴(kuò)增由30次循環(huán)構(gòu)成，其條件為：
變性：溫度為94℃，時(shí)間為30秒；
退火：溫度為58℃，時(shí)間為30秒；
延伸：溫度為72℃，時(shí)間為90秒；
擴(kuò)增結(jié)束后于4℃保存至電泳檢測(cè)。
該專利技術(shù)資料僅供研究查看技術(shù)是否侵權(quán)等信息，商用須獲得專利權(quán)人授權(quán)。該專利全部權(quán)利屬于協(xié)和干細(xì)胞基因工程有限公司;天津?yàn)I海協(xié)和基因科技有限公司，未經(jīng)協(xié)和干細(xì)胞基因工程有限公司;天津?yàn)I海協(xié)和基因科技有限公司許可，擅自商用是侵權(quán)行為。如果您想購(gòu)買此專利、獲得商業(yè)授權(quán)和技術(shù)合作，請(qǐng)聯(lián)系【客服】
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