[發明專利]用于檢測丙氨酸氨基轉移酶的多層膜干化學試劑片

無效

• 申請號: 201110273872.1
• 申請日: 2011-09-16
• 公開（公告）號: CN102323399A
• 公開（公告）日: 2012-01-18
• 發明（設計）人: 白鵬利;唐玉國;程文播;孫海旋;王心醉;王弼陡
• 申請（專利權）人: 蘇州生物醫學工程技術研究所
• 主分類號: G01N33/52
• 分類號: G01N33/52;G01N21/31
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 樓高潮

技術領域

本發明屬于體外臨床診斷試劑技術領域，具體的涉及一種用于檢測丙氨酸氨基轉移酶的多層膜干化學試劑片，可用于檢測血漿、血清中的轉氨酶。

背景技術

丙氨酸氨基轉移酶（Alanine?aminotransferase,?ALT）又稱為谷丙轉氨酶，主要存在于肝細胞血漿內，細胞內濃度高于血清濃度1000-3000倍，只要有1%肝組織發生破壞，就可以使血清中濃度升高一倍，被世界衛生組織推薦為肝功能損害最敏感的檢測指標。檢測血液中的丙氨酸氨基轉氨酶對急性乙型肝炎、慢性肝炎、HBV攜帶者、重型肝炎以及肝硬化、肝癌等一系列病毒性肝炎的診斷和分析有重要意義。?

目前丙氨酸氨基轉移酶普遍采用各種生化分析儀器檢測，這些儀器都需要使用各種液體試劑，這對某些使用場合帶來不便。一是液體試劑保持時間不能過長已經大量試劑可能造成浪費；二是液體試劑不便于運輸。

臨床急診生化指標所使用的干化學產品基本上是國外公司的產品，大概有三種類型的產品。第一類是以強生公司為代表的多層膜干片的干化學技術，利用感光膠片的涂層技術將擴散層、反射層、試劑層等試劑涂在透明支撐層上，從支撐層的反面測定光密度的變化。第二類是日本京都公司的干化學技術，其組成為一塑料支撐層，一端為反應區包括樣品層和試劑層，試劑層為某種織物作為試劑載體。加樣和測試同時在上部進行。第三類為羅氏公司的干化學產品，將試劑層涂在多絲的纖維或者織物上，全血通過玻璃纖維橫向過濾后與上試劑層接觸反應，通過上部覆蓋一透明的支撐層上涂有試劑層和反射層，最上部覆蓋一層合成纖維網布作為加樣層。以強生公司為代表的多層膜干片生產工藝復雜，對材料設備要求高；以日本京都公司為代表的干片有某些缺陷，如在加樣端容易產生一定的氣泡、過量液體等，加樣和測定在同一測樣品可能造成干擾。

國內有公司申請了干化學專利，上海科華生物工程公司申請的專利200720072185.2和200710044719.5，無錫申瑞生物制品有限公司的專利200610161430.7，其中描述了丙氨酸氨基轉移酶的測定的干化學試紙條，在這些專利中應用的方法是將配好的檢測液直接浸泡在濾紙或者纖維膜上，然后粘合在塑料基材上進行測試，這種方法是將濾紙或者纖維素膜在檢測試劑中浸泡，吸附于濾紙或者纖維素膜中的試劑的量無法確定，重復性不能充分保證，缺乏準確性和精密性；此外，該法采用色原顯色在610nm-650nm檢測，而檢測丙氨酸氨基轉移酶的國際標準采用速率法，在340nm處監測NADH的氧化速率，反應原理如下所示。

采用干化學試劑片法丙氨酸氨基轉移酶的快速檢測對疾病的篩查具有重要意義。

發明內容

為克服現有技術中的不足，本發明的目的在于提供一種能夠提高檢測的準確性和精密度，同時還能提高干片的保存時間的用于檢測丙氨酸氨基轉移酶的多層膜干化學試劑片。

為了解決上述技術問題，實現上述目的，本發明通過如下技術方案實現：

用于測定丙氨酸氨基轉移酶的多層膜干化學試劑片，包括一下支撐層，所述下支撐層的一端開設有測試孔，其還包一多層膜，所述多層膜包括依次由下往上迭合的透光層、試劑層、輔助層和擴散層，所述多層膜的透光層的一面粘合固定于所述下支撐層的測試孔處。

進一步的，所述擴散層之上設置一上支撐層，所述上支撐層上開設有一加樣孔，所述加樣孔位于所述上支撐層與所述擴散層結合的位置。

進一步的，所述上支撐層與所述下支撐層之間的孔隙處設置有一中間支撐層。

進一步的，所述透光層為在330nm-380nm透光率在80%以上的透明塑料，厚度為20-300μm。所述透光層可以由各種透明塑料（如聚乙烯ＰＥ、聚丙烯ＰＰ、聚對苯二甲酸乙二醇酯ＰＥＴ、聚碳酸酯PC等）、玻璃等制備而成，尤其以PET為最佳。透光層的厚度以100-200μm為最佳。在340nm-365nm范圍透光率80%以上，95%以上為最佳。光源從測試孔入射，并透過透光層，優選的，采用340nm檢測，要求所選透光層對340nm波長的光透過率達80%以上。

進一步的，所述試劑層內包含水溶性高分子材料及緩沖液、乳酸脫氫酶和NADH。丙氨酸氨基轉移酶分子量較大，不容易透過擴散層進入試劑層，因此，將丙氨酸氨基轉移酶的底物置于擴散層，使其能夠充分接觸，并發生催化反應，產物順利進入試劑層，進行后續的反應。