[發(fā)明專利]人降鈣素原B細胞表位肽段及其單克隆抗體的應(yīng)用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201110273395.9 | 申請日: | 2011-09-15 |
| 公開(公告)號: | CN102702324A | 公開(公告)日: | 2012-10-03 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人: | 黃洪濤;陳安;易維京;石延賓;姚靜;張憲;胡偉;魏勇 | 申請(專利權(quán))人: | 重慶業(yè)為基生物科技有限公司 |
| 主分類號: | C07K7/08 | 分類號: | C07K7/08;C07K19/00;C07K16/26;C12N5/20;G01N33/74;C12R1/91 |
| 代理公司: | 北京同恒源知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11275 | 代理人: | 趙榮之 |
| 地址: | 400039 重慶市九龍坡區(qū)二郎*** | 國省代碼: | 重慶;85 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關(guān)鍵詞: | 降鈣素 細胞 表位肽段 及其 單克隆抗體 應(yīng)用 | ||
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及免疫分析醫(yī)學領(lǐng)域,特別涉及細胞表位肽段抗原及其單克隆抗體的應(yīng)用。?
背景技術(shù)
細菌性感染只要能夠早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷、針對性的早期治療,大多預(yù)后良好。否則,可能發(fā)展成為重度菌血癥或/和嚴重膿毒癥。根據(jù)美國CDC的報告,目前膿毒癥已經(jīng)成為非心臟ICU死亡的主要原因(N?Engl?J?Med.2003;348:?1546-1554),因此感染性炎癥的早期診斷極為重要。另外,隨著細菌耐藥性、重癥感染患者的增加,如何指導(dǎo)臨床用藥也顯得愈發(fā)重要。?
降鈣素原(procalcitonin,PCT)是上世紀九十年代才發(fā)現(xiàn)的細菌、真菌性感染的特異性標志物,是一種無激素活性的降鈣素前肽,有116個氨基酸組成,1~57為?N-殘端,60~91為降鈣素,96~116為降鈣蛋白。分子量為13kD,由位于11號染色體?(11p1514)?上的CALC-1基因編碼,半衰期為25~30小時,在體內(nèi)外穩(wěn)定性好,不會降解為降鈣素,亦不受體內(nèi)激素水平的影響,實驗室檢測快速簡便,有利于臨床特別是急診廣泛開展應(yīng)用。?
在嚴重全身性細菌、真菌、寄生蟲、急性瘧疾感染、系統(tǒng)炎性反應(yīng)綜合癥(SIRS)、多器官功能衰竭綜合癥(MODS)的診斷方面,PCT是一個具有高靈敏度、特異性的新指標。PCT主要是在細菌毒素和炎性細胞因子的刺激下產(chǎn)生,而在非感染性炎癥狀態(tài)下血清PCT一般不升高,感染性炎癥過程中,PCT的生成非常快,對內(nèi)毒素刺激反應(yīng)2~6小時內(nèi)即升高,嚴重全身感染者血PCT在24?h內(nèi)可升高達1000倍。PCT作為一種新的感染性炎性標志物目前已被廣泛認可。不僅能早期鑒別細菌與非細菌感染,更是敗血癥的預(yù)警和診斷指標,且PCT與細菌感染的程度成正相關(guān),它的上升或下降直接反應(yīng)疾病惡化或好轉(zhuǎn)的趨勢,因此,PCT的檢測在細菌性感染、敗血癥、MODS的鑒別診斷、預(yù)后判斷、療效觀察及合理指導(dǎo)應(yīng)用抗菌藥等均有重要參考價值。?
現(xiàn)有技術(shù)對PCT的制備方法多直接取自組織細胞,如甲狀旁腺組織,成本高,制備過程復(fù)雜,獲得產(chǎn)品量低,制約了對PCT的研究及應(yīng)用開發(fā)。利用基因工程方法制備PCT重組蛋白是一種簡單、經(jīng)濟、可靠的方法,可大量制備PCT蛋白,并且在此基礎(chǔ)上可進一步制備抗PCT抗體,以進行PCT免疫檢測。免疫檢測的首要關(guān)鍵問題是如何獲得特異性針對PCT的抗體,而且最好獲得針對不同抗原決定簇的特異性抗體,所以進行預(yù)測選擇PCT的B細胞免疫表位尤為重要。目前還沒有相應(yīng)的研究。?
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的之一在于提供降鈣素原B細胞表位肽段及其衍生物,其能作為降鈣素原單克隆抗體的抗原。本發(fā)明的目的之二在于提供一種雜交瘤細胞,其能特異性的分泌降鈣素原單克隆抗體。同時,本發(fā)明還提供所述一種單克隆抗體,其可作為加檢測降鈣素原的試劑。?
為實現(xiàn)上述目的,本發(fā)明的技術(shù)方案為:?
1、人降鈣素原B細胞表位肽段,人降鈣素原B細胞表位肽段的氨基酸序列如SEQ?ID?NO:3所示。
2、含有1所述的人降鈣素原B細胞表位肽段的衍生物,所述的人降鈣素原B細胞表位肽段的衍生物為所述人降鈣素原B細胞表位肽段偶聯(lián)有載體蛋白BSA或KLH。?
3、根據(jù)2所述的人降鈣素原B細胞表位肽段的衍生物,所述的人降鈣素原B細胞表位肽段在N末端引入半胱氨酸。?
4、1-3任一項所述的人降鈣素原B細胞表位肽段制備的單克隆抗體的雜交瘤細胞。?
5、根據(jù)4所述的雜交瘤細胞,雜交瘤細胞的生物保藏號為CCTCC?NO:C201137。?
6、5所述的雜交瘤細胞分泌的單克隆抗體。?
本發(fā)明的目的還在于提供上述單克隆抗體的制備方法,該方法操作簡單,適用于大規(guī)模生產(chǎn)該單克隆抗體。?
為實現(xiàn)上述目的,本發(fā)明的技術(shù)方案在于:?
所述的單克隆抗體的制備方法:用如SEQ?ID?NO:3所示氨基酸序列的人降鈣素原B細胞表位肽段為抗原,免疫所得的血清效價大于1:3200的動物的脾細胞與SP2/0骨髓瘤細胞融合,經(jīng)篩選克隆獲得分泌單克隆抗體的雜交瘤細胞株,所述雜交瘤細胞株分泌,得單克隆抗體。
本發(fā)明的另一目的在于提供所述單克隆抗體的應(yīng)用,該應(yīng)用為檢測降鈣素原提供了新思路。?
為實現(xiàn)上述目的,本發(fā)明的技術(shù)方案在于:?
所述的單克隆抗體在制備用于檢測降鈣素原的診斷試劑中的應(yīng)用。
進一步,所述單克隆抗體與PCT重組蛋白聯(lián)合用于制備檢測降鈣素原的診斷試劑中的應(yīng)用。?
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