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[發明專利]人降鈣素原B細胞表位肽段及其單克隆抗體的應用有效

專利信息
申請號: 201110273395.9 申請日: 2011-09-15
公開(公告)號: CN102702324A 公開(公告)日: 2012-10-03
發明(設計)人: 黃洪濤;陳安;易維京;石延賓;姚靜;張憲;胡偉;魏勇 申請(專利權)人: 重慶業為基生物科技有限公司
主分類號: C07K7/08 分類號: C07K7/08;C07K19/00;C07K16/26;C12N5/20;G01N33/74;C12R1/91
代理公司: 北京同恒源知識產權代理有限公司 11275 代理人: 趙榮之
地址: 400039 重慶市九龍坡區二郎*** 國省代碼: 重慶;85
權利要求書: 查看更多 說明書: 查看更多
摘要:
搜索關鍵詞: 降鈣素 細胞 表位肽段 及其 單克隆抗體 應用
【說明書】:

技術領域

發明涉及免疫分析醫學領域,特別涉及細胞表位肽段抗原及其單克隆抗體的應用。?

背景技術

細菌性感染只要能夠早期發現、早期診斷、針對性的早期治療,大多預后良好。否則,可能發展成為重度菌血癥或/和嚴重膿毒癥。根據美國CDC的報告,目前膿毒癥已經成為非心臟ICU死亡的主要原因(N?Engl?J?Med.2003;348:?1546-1554),因此感染性炎癥的早期診斷極為重要。另外,隨著細菌耐藥性、重癥感染患者的增加,如何指導臨床用藥也顯得愈發重要。?

降鈣素原(procalcitonin,PCT)是上世紀九十年代才發現的細菌、真菌性感染的特異性標志物,是一種無激素活性的降鈣素前肽,有116個氨基酸組成,1~57為?N-殘端,60~91為降鈣素,96~116為降鈣蛋白。分子量為13kD,由位于11號染色體?(11p1514)?上的CALC-1基因編碼,半衰期為25~30小時,在體內外穩定性好,不會降解為降鈣素,亦不受體內激素水平的影響,實驗室檢測快速簡便,有利于臨床特別是急診廣泛開展應用。?

在嚴重全身性細菌、真菌、寄生蟲、急性瘧疾感染、系統炎性反應綜合癥(SIRS)、多器官功能衰竭綜合癥(MODS)的診斷方面,PCT是一個具有高靈敏度、特異性的新指標。PCT主要是在細菌毒素和炎性細胞因子的刺激下產生,而在非感染性炎癥狀態下血清PCT一般不升高,感染性炎癥過程中,PCT的生成非常快,對內毒素刺激反應2~6小時內即升高,嚴重全身感染者血PCT在24?h內可升高達1000倍。PCT作為一種新的感染性炎性標志物目前已被廣泛認可。不僅能早期鑒別細菌與非細菌感染,更是敗血癥的預警和診斷指標,且PCT與細菌感染的程度成正相關,它的上升或下降直接反應疾病惡化或好轉的趨勢,因此,PCT的檢測在細菌性感染、敗血癥、MODS的鑒別診斷、預后判斷、療效觀察及合理指導應用抗菌藥等均有重要參考價值。?

現有技術對PCT的制備方法多直接取自組織細胞,如甲狀旁腺組織,成本高,制備過程復雜,獲得產品量低,制約了對PCT的研究及應用開發。利用基因工程方法制備PCT重組蛋白是一種簡單、經濟、可靠的方法,可大量制備PCT蛋白,并且在此基礎上可進一步制備抗PCT抗體,以進行PCT免疫檢測。免疫檢測的首要關鍵問題是如何獲得特異性針對PCT的抗體,而且最好獲得針對不同抗原決定簇的特異性抗體,所以進行預測選擇PCT的B細胞免疫表位尤為重要。目前還沒有相應的研究。?

發明內容

本發明的目的之一在于提供降鈣素原B細胞表位肽段及其衍生物,其能作為降鈣素原單克隆抗體的抗原。本發明的目的之二在于提供一種雜交瘤細胞,其能特異性的分泌降鈣素原單克隆抗體。同時,本發明還提供所述一種單克隆抗體,其可作為加檢測降鈣素原的試劑。?

為實現上述目的,本發明的技術方案為:?

1、人降鈣素原B細胞表位肽段,人降鈣素原B細胞表位肽段的氨基酸序列如SEQ?ID?NO:3所示。

2、含有1所述的人降鈣素原B細胞表位肽段的衍生物,所述的人降鈣素原B細胞表位肽段的衍生物為所述人降鈣素原B細胞表位肽段偶聯有載體蛋白BSA或KLH。?

3、根據2所述的人降鈣素原B細胞表位肽段的衍生物,所述的人降鈣素原B細胞表位肽段在N末端引入半胱氨酸。?

4、1-3任一項所述的人降鈣素原B細胞表位肽段制備的單克隆抗體的雜交瘤細胞。?

5、根據4所述的雜交瘤細胞,雜交瘤細胞的生物保藏號為CCTCC?NO:C201137。?

6、5所述的雜交瘤細胞分泌的單克隆抗體。?

本發明的目的還在于提供上述單克隆抗體的制備方法,該方法操作簡單,適用于大規模生產該單克隆抗體。?

為實現上述目的,本發明的技術方案在于:?

所述的單克隆抗體的制備方法:用如SEQ?ID?NO:3所示氨基酸序列的人降鈣素原B細胞表位肽段為抗原,免疫所得的血清效價大于1:3200的動物的脾細胞與SP2/0骨髓瘤細胞融合,經篩選克隆獲得分泌單克隆抗體的雜交瘤細胞株,所述雜交瘤細胞株分泌,得單克隆抗體。

本發明的另一目的在于提供所述單克隆抗體的應用,該應用為檢測降鈣素原提供了新思路。?

為實現上述目的,本發明的技術方案在于:?

所述的單克隆抗體在制備用于檢測降鈣素原的診斷試劑中的應用。

進一步,所述單克隆抗體與PCT重組蛋白聯合用于制備檢測降鈣素原的診斷試劑中的應用。?

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