[發明專利]一種具有手性信號的不對稱金納米粒子二聚體的制備方法

無效

• 申請號: 201110272662.0
• 申請日: 2011-09-15
• 公開（公告）號: CN102442638A
• 公開（公告）日: 2012-05-09
• 發明（設計）人: 王利兵;胥傳來;嚴文靜
• 申請（專利權）人: 王利兵;胥傳來;嚴文靜
• 主分類號: B82B3/00
• 分類號: B82B3/00;C12Q1/68;B82Y40/00
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所 32104
• 代理人: 時旭丹;劉品超

1.一種具有手性信號的不對稱金納米粒子二聚體的制備方法，其特征在于：金納米粒子的合成、金納米粒子用保護劑鉀鹽包裹，金納米粒子修飾DNA以及不對稱金納米粒子二聚體的組裝；具體步驟為：

（1）20nm金納米粒子合成

20nm金納米粒子用檸檬酸三納還原氯金酸法合成；

（2）10nm金納米粒子的合成

10nm金納米粒子用單寧酸和檸檬酸三鈉還原氯金酸合成；

（3）金納米粒子用保護劑鉀鹽包裹

步驟（1）合成的20nm金納米粒子及步驟（2）合成的10nm金納米粒子分別用二水合雙(對-磺酰苯基)苯基膦化二鉀鹽溶液進行包裹使得在NaCl溶液中穩定存在；

（4）20nm金納米粒子和DNA-1偶聯

步驟（3）包裹的20nm的金納米粒子和巰基修飾的DNA-1通過巰基-SH進行偶聯形成20nm金納米粒子-DNA-1復合體；

（5）10nm金納米粒子和DNA-2偶聯

步驟（3）包裹的10nm的金納米粒子和巰基修飾的DNA-2通過巰基-SH進行偶聯形成10nm金納米粒子-DNA-2復合體；

（6）不對稱金納米粒子二聚體的組裝

將步驟（4）制備的20nm金納米粒子-DNA-1復合體和步驟（5）制備的10nm金納米粒子-DNA-2復合體進行組裝，形成不對稱金納米粒子二聚體，并對此結構進行表征；

DNA-1：5’-tttgcctgga?gatacatgca?cattacggct?ttccctatta?gaaggtctca?ggtgcgcgtt?tcggtaagta?gacgggacca?gttcgcc-3’；

DNA-2：5’-tttcgcgcac?ctgagacctt?ctaatagggt?ttgcgacagt?cgttcaacta?gaatgccctt?tgggctgttc?cgggtgtggc?tcgtcgg-3’。

2.根據權利要求1所述的具有手性信號的不對稱金納米粒子二聚體的制備方法，其特征在于：

（1）20nm?金納米粒子的合成

20nm金納米粒子的合成：潔凈的三口燒瓶中加入97.5mL超純水，加入2.5mL質量濃度0.4%氯金酸溶液，攪拌并加熱至沸騰，7-8min后加入1.6mL?質量濃度1%檸檬酸三鈉溶液，溶液從無色變為紅色后，停止加熱，繼續攪拌15min；透射電鏡顯示20nm；

（2）10nm?金納米粒子的合成

10nm金納米粒子的合成：潔凈的三口燒瓶中加入79mL超純水，1mL?1%氯金酸溶液作為A液；取一潔凈的小瓶子，加入4mL?1%檸檬酸三鈉溶液，0.1mL?1%單寧酸溶液，0.1mL?25mM碳酸鉀溶液和15.8mL超純水作為B液；A、B液均加熱到60℃，然后在高速攪拌下把B液迅速加入A液中，最終反應液在60℃下繼續攪拌30min形成深紅色溶液，然后將溶液加熱回流2min形成亮紅色溶液，最后冷卻到室溫形成檸檬酸穩定的金納米粒子，透射電鏡顯示10nm；

（3）鉀鹽包裹的金納米粒子的制備

步驟（1）制備的20nm金納米粒子及步驟（2）制備的10nm金納米粒子各取5mL?100nM，分別各加入5μL?40mg/mL二水合雙(對-磺酰苯基)苯基膦化二鉀鹽溶液，室溫震蕩10h；前者用7000r/min及后者用13000r/min，離心10min后去除上清液，加超純水恢復到原體積；

（4）20nm金納米粒子偶聯DNA-1

步驟（3）制備的鉀鹽包裹的20nm金納米粒子取50μL置于PCR管中，加入1μL?10μM的DNA-1，混勻，向體系中加入?5μL?5×tris-硼酸緩沖液和1.25μL?2M?NaCl溶液，25℃靜置反應2h；7000r/min離心10min，去除上清液，沉淀加水稀釋至原體積2倍；

（5）10nm金納米粒子偶聯DNA-2

步驟（3）制備的鉀鹽包裹的10nm金納米粒子取50μL置于PCR管中，加入1μL?10μM的DNA-2，混勻，向體系中加入?5μL?5×tris-硼酸緩沖液和1.25μL?2M?NaCl溶液，25℃靜置反應2h；13000r/min離心10min，去除上清液，沉淀加水稀釋至原體積2倍；

（6）?不對稱金納米粒子二聚體的組裝

取40μL步驟（4）制備的20nm金納米粒子-DNA-1復合體；取20μL步驟（5）制備的10nm金納米粒子-DNA-2復合體；兩者于PCR管中混合，90℃水浴5min，在水蒸氣中緩慢降到室溫，形成不對稱金納米粒子二聚體。