[發明專利]使用干燥的試劑借助PCR擴增DNA的方法及裝置

無效

• 申請號: 201110271914.8
• 申請日: 2005-04-26
• 公開（公告）號: CN102409039A
• 公開（公告）日: 2012-04-11
• 發明（設計）人: 沃爾特.岡布里克特;彼得.波里卡;曼弗雷德.斯坦澤爾
• 申請（專利權）人: 西門子公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12M1/38;C12M1/36
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所 11105
• 代理人: 賈靜環

1.借助含DNA的物質的熱循環用PCR法擴增DNA的方法，所述含DNA的物質包含相應試劑，該方法包括下列措施：

-所有材料和操作步驟的充分整合在封閉的分析單位中進行，所述封閉的分析單位帶有可一次性使用、并帶有微通道或微空腔的筒盒，其中在所述筒盒中儲存有至少在室溫下穩定存放的、為PCR所必需的試劑，

-首先，將水溶性試劑用非水溶性介質薄層覆蓋，并

-將待擴增DNA引入水性溶劑中，

-接著消除非水溶性介質的覆蓋效果，由此

-水溶性試劑溶于水性溶劑中，

-據此啟動PCR-熱循環反應。

2.權利要求1所述的方法，其中，作為用于PCR的試劑，使用無水、室溫下經數月可穩定儲存的物質，其在引入水后能進行PCR。

3.權利要求1所述的方法，其中，對于結合在生物結構中的DNA，例如全血樣品，將結構的分解，例如白血細胞的細胞分解，與PCR整合在一起。

4.權利要求1所述的方法，其中，使用具有幾何形狀的分析單位(筒盒)，所述幾何形狀能使高效而快速的熱循環成為可能。

5.前述權利要求中任何一項所述的方法，其中，使用一次性產品作為實施反應的分析單位，所述一次性產品小且成本低從而可批量制造。

6.前述權利要求中任何一項所述的方法，其中，PCR反應在陣列裝置中對于不同DNA擴增同時進行，所述陣列裝置任選具有不同引物。

7.權利要求6所述的方法，其中，針對不同的DNA擴增使用不同組成的PCR試劑。

8.權利要求6所述的方法，其中，在陣列中充滿DNA樣品，PCR空腔(250_ik)被蓋子(210)封閉并隔絕互相流動，使石蠟層(260)融化并同時進行單個的DNA擴增。

9.實施權利要求1的方法或權利要求2至8中任何一項所述方法的裝置，其帶有作為可一次性使用的筒盒來實施的分析單位，至少一個用來容納PCR試劑的微通道(5)及/或微空腔(20)，其中，PCR試劑作為在室溫下形成穩定物質的混合物被引入、并用水不溶性介質層(26)覆蓋。

10.權利要求9所述的裝置，其特征在于，所述混合物是無水固體。

11.權利要求9所述的裝置，其中，所述固體(25)附著在微通道(5)或微空腔(20)的壁上。

12.權利要求9所述的裝置，其中，用成膜劑形成PCR試劑膜。

13.權利要求9所述的裝置，其中，所述水不溶性介質是石蠟。

14.權利要求9所述的裝置，其中，所述石蠟具有確定的熔點以釋放PCR試劑。

15.權利要求9至13中任何一項所述的裝置，其中，為了在微空腔(20)或微通道(5)中進行細胞分解，還存在溶胞試劑，所述溶胞試劑例如對白血細胞具有特異性質。

16.權利要求15所述的裝置，其中，所述溶胞試劑由可干燥物質組成，所述可干燥物質具有可忽略不計的蒸汽壓，所述可干燥物質在室溫下是儲藏穩定的，并且所述溶胞試劑附著在微通道(5)的壁上，所述微通道(5)位于PCR空腔(20)上游，其中溶胞物質的通道(5)通入PCR空腔(20)。

17.權利要求9至15中任何一項所述的裝置，其中，在微通道(5)或微空腔(20)中設有基質，所述基質具有DNA結合性質。

18.權利要求17所述的裝置，其中，所述DNA結合的基質是所謂磁珠。

19.權利要求9至18中任何一項所述的裝置，其中，所述溶胞試劑和磁珠包含在共同的干燥基質中。

20.權利要求9至19中任何一項所述的裝置，其中，設有全血樣品輸入口(2)。

21.權利要求9至20中任何一項所述的裝置，其中，設有用來引入水的機構。

22.權利要求9至21中任何一項所述的裝置，其中，設有用來混合血液樣品和水或緩沖液的機構。