[發明專利]奶牛乳房炎鏈球菌亞單位疫苗GapC蛋白及其制備方法和應用

無效

• 申請號: 201110270934.3
• 申請日: 2011-09-14
• 公開（公告）號: CN102304174A
• 公開（公告）日: 2012-01-04
• 發明（設計）人: 朱戰波;崔玉東;車車;張軍;于立權;周玉龍;柳強;朱洪偉;王鶴;楊玉英
• 申請（專利權）人: 黑龍江八一農墾大學
• 主分類號: C07K14/315
• 分類號: C07K14/315;C12N15/31;C12N15/63;A61K39/09;A61P31/04
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王朋飛;王加嶺

1.一種奶牛乳房炎鏈球菌亞單位疫苗GapC蛋白，其特征在于，所述GapC蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?No.1所示。

2.編碼權利要求1所述GapC蛋白的基因。

3.含有權利要求2所述基因的載體。

4.制備權利要求1所述GapC蛋白的方法，其特征在于，該方法包括下述步驟：

(1)提取牛源鏈球菌DNA序列；

(2)根據NCBI數據庫已公布序列AF375662設計引物，PCR擴增出GapC基因；

(3)將回收的該基因與pMD18-T載體連接后，轉化到大腸桿菌XL-1-Blue中，經酶切鑒定，篩選陽性克隆，序列測定；

(4)酶切pMD18-T-GapC及pQE-30質粒，構建重組載體pQE-30-GapC，轉化大腸桿菌XL-1-Blue，篩選出的陽性克隆培養后提取質粒，進行雙酶切鑒定；

(5)在大腸桿菌XL-1-Blue中獲得高表達的上述重組工程菌，隨后經鎳柱純化后得到目的蛋白，即為GapC蛋白。

5.如權利要求4所述的方法，其特征在于，步驟(5)中所述重組工程菌經過發酵培養進行優化，其發酵培養的條件為溫度37℃、pH值7.0、裝液量20％、種齡12-16h、轉數180-220rpm、接種量為1％-3％。

6.如權利要求4或5所述的方法，其特征在于，擴增GapC基因所用的引物如下所示，

5′-CGCATGGTAGTTAAAGTTGGTATT-3′

5′-GACAGCGATTTTTGCAAAATACTC-3′。

7.如權利要求4或5所述的方法，其特征在于，所述PCR反應條件為：95℃預變性15min，94℃?45s，56℃?45s，72℃?2min，30個循環，72℃?10min。

8.如權利要求4或5所述的方法，其特征在于，牛源鏈球菌為停乳鏈球菌(S.dysgalactiae)。

9.含有權利要求1所述GapC蛋白的亞單位疫苗。

10.權利要求1所述GapC蛋白在制備預防奶牛乳房炎亞單位疫苗中的應用。