[發明專利]一種利用DNA甲基化的方法檢測苯丙酮尿癥的試劑盒

無效

• 申請號: 201110268599.3
• 申請日: 2011-09-13
• 公開（公告）號: CN102304583A
• 公開（公告）日: 2012-01-04
• 發明（設計）人: 林明;周柔麗;楊華;李莉;邵根澤;肖軍軍
• 申請（專利權）人: 北京大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/113
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 史雙元

1.一種利用DNA甲基化的方法檢測苯丙酮尿癥的試劑盒，包括dNTP、10xPCR?buffer、MgCl₂、ddH₂O、Taq?DNA聚合酶，其特征在于，還包括標準血液DNA、引物MSP-R、引物MSP-L、引物UMSP-R、引物UMSP-L、引物BSP-R1、引物BSP-L1、引物BSP-R2、引物BSP-L2；所述引物MSP-R的核苷酸序列如序列表中SEQ?ID?No.1所示，引物MSP-L的核苷酸序列如序列表中SEQ?ID?No.2所示，引物UMSP-R的核苷酸序列如序列表中SEQ?ID?No.3所示，引物UMSP-L的核苷酸序列如序列表中SEQ?ID?No.4所示，引物BSP-R1的核苷酸序列如序列表中SEQ?ID?No.5所示，引物BSP-L1的核苷酸序列如序列表中SEQ?ID?No.6所示，引物BSP-L2的核苷酸序列如序列表中SEQ?ID?No.7所示，引物BSP-R2的核苷酸序列如序列表中SEQ?ID?No.8所示；上述引物用于做甲基化特異性PCR，PCR時，引物的配對方案為：

引物MSP-R、MSP-L配對，引物UMSP-R、UMSP-L配對，引物BSP-R1、BSP-L1配對，引物BSP-R2、BSP-L2配對，用于檢測ASS基因(GeneBankNG_011542，精氨酸代琥珀酸合成酶基因)啟動子區甲基化情況。

2.根據權利要求1所述一種利用DNA甲基化的方法檢測苯丙酮尿癥的試劑盒，其特征在于，所述標準血液DNA為取自無苯丙酮尿癥健康人血液提取的基因組DNA并經過重亞硫酸鹽處理。

3.一種利用DNA甲基化的方法檢測苯丙酮尿癥的標志物，其特征在于，所述標志物為ASS基因(GeneBank?NG_011542，精氨酸代琥珀酸合成酶基因)甲基化的啟動子區域，該區域包括一個或多個甲基化的CpG島；所述ASS(GeneBankNG_011542，精氨酸代琥珀酸合成酶基因)基因甲基化的啟動子區域核苷酸序列如序列表中SEQ?ID?No.9、SEQ?ID?No.10和SEQ?ID?No.11所示。

4.權利要求1所述利用DNA甲基化的方法檢測苯丙酮尿癥的試劑盒的使用方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)從血液樣品中提取基因組DNA；

(2)將基因組DNA經重亞硫酸鹽處理，使未甲基化的胞嘧啶全部轉變為尿嘧啶；

(3)利用權利要求1所述試劑盒及引物配對方案，以ddH₂O、標準血液DNA、經重亞硫酸鹽處理的血液樣品基因組DNA為模板，進行甲基化特異性PCR反應；

(4)用1.5％瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR結果，如果以ddH₂O、標準血液DNA為模板的PCR無擴增條帶，而以經重亞硫酸鹽處理的血液樣品基因組DNA為模板的PCR擴增有擴增條帶，且擴增條帶與預測的條帶大小一致，則認為所檢測的血液樣品來自苯丙酮尿癥患者。