[發明專利]重組生物及由重組生物制作的蛋白質

無效

• 申請號: 201110268192.0
• 申請日: 2011-09-09
• 公開（公告）號: CN102428897A
• 公開（公告）日: 2012-05-02
• 發明（設計）人: 趙天福;中垣雅雄
• 申請（專利權）人: 岡本株式會社
• 主分類號: A01K67/04
• 分類號: A01K67/04;C12N15/12;C07K14/435
• 代理公司: 永新專利商標代理有限公司 72002
• 代理人: 白麗;陳建全

技術領域

本發明涉及重組生物及由重組生物制作的蛋白質。

背景技術

作為具有優異強度的天然纖維，蜘蛛絲備受關注。但是，蜘蛛由于會互相殘食因而不適于集體飼養，由1只蜘蛛獲得的絲的量是很微量的。而且，由于蜘蛛會根據目的分別使用多種類的絲，因而蜘蛛絲的大量生產是很困難的。

因此，嘗試了使用基因重組技術將編碼蜘蛛絲蛋白的基因導入到蜘蛛以外的生物中來制作蜘蛛絲。例如公開了在基因重組山羊中制作蜘蛛絲蛋白、從山羊奶中獲得蜘蛛絲蛋白的方法(專利文獻1：日本特表2002-506642號公報)。但是，利用上述方法時，需要對蜘蛛絲蛋白進行抽提、精制、人工紡絲，在人手時間、成本、溶劑對環境的負荷等方面存在問題。

為了解決上述問題，嘗試了在桑蠶中導入編碼蜘蛛絲蛋白的基因來制作蜘蛛絲蛋白(專利文獻2：國際公開第2005/068495號小冊子)。根據重組桑蠶，由于蜘蛛絲蛋白以蠶絲的形式被吐絲，因而不需要上述抽提、精制、紡絲等處理。

發明內容

但是，由現有的重組桑蠶制作的蠶絲的物性遠遠不及本來的蜘蛛絲的物性，強度不足。

因而，本發明的目的在于提供制作具有優異物性的蛋白質的重組生物以及由該重組生物制作的物性優異的蛋白質。另外，本發明的目的在于提供制作具有充分優異強度的蠶絲的重組桑蠶以及由該重組桑蠶制作的具有充分優異強度的蠶絲。

本發明人等為了達成上述目的進行了深入研究，結果發現當在被重組生物中導入橫紋金蛛的基因時所得蛋白質的物性優異，從而完成了本發明。

即，本發明涉及導入有下述(i)～(iv)中任一種核酸的重組生物以及由上述重組生物制作的蛋白質。

(i)具有序列號1的堿基序列的核酸

(ii)編碼具有序列號2的氨基酸序列的蛋白質的核酸

(iii)與上述(i)的核酸具有90％以上的序列同一性且編碼牽引絲蛋白的核酸

(iv)在嚴格(stringent)的條件下與上述(i)的核酸的互補鏈雜交且編碼牽引絲蛋白的核酸

通過導入上述特定的核酸，重組生物所制作的蛋白質變得含有很多蜘蛛蛋白，結果強度等物性變得優異。

特別是，本發明涉及導入有上述(i)～(iv)中任一種核酸的重組桑蠶、由上述重組桑蠶制作的蛋白質以及由上述重組桑蠶制作的蠶絲。通過將上述特定的核酸導入到桑蠶中，重組桑蠶所制作的蠶絲變得含有很多蜘蛛蛋白，結果變得具有充分的強度。

根據本發明，能夠提供制作具有優異物性的蛋白質的重組生物以及由該重組生物制作的物性優異的蛋白質。另外，本發明還能夠提供制作具有充分優異強度的蠶絲的重組桑蠶以及由該重組桑蠶制作的具有充分優異強度的蠶絲。

附圖說明

圖1為表示基因重組用載體質粒的結構的示意圖。

圖2為表示插入蜘蛛基因表達盒的位置的下游的桑蠶基因組序列的圖。

圖3為表示用SDS-PAGE將基因重組桑蠶所制作的蠶絲的蛋白質進行分離的結果的圖。

圖4為表示重組桑蠶(A)與非重組桑蠶(B)的蠶絲的掃描電子顯微鏡照片。

具體實施方式

以下根據需要一邊參照附圖一邊詳細地說明用于實施本發明的方式。但本發明并不限定于以下的實施方式。

本發明涉及導入有下述(i)～(iv)中任一種核酸的重組生物以及由上述重組生物制作的蛋白質。

(i)具有序列號1的堿基序列的核酸

(ii)編碼具有序列號2的氨基酸序列的蛋白質的核酸

(iii)與上述(i)的核酸具有90％以上的序列同一性且編碼牽引絲蛋白的核酸

(iv)在嚴格的條件下與上述(i)的核酸的互補鏈雜交且編碼牽引絲蛋白的核酸

特別是，本發明涉及導入有上述(i)～(iv)中任一種核酸的重組桑蠶、由上述重組桑蠶制作的蛋白質以及由上述重組桑蠶制作的蠶絲。

具有序列號1的堿基序列的核酸就金蛛屬橫紋金蛛(Argiope?bruennichi)而言是編碼作為牽引絲(或經紗)蛋白主成分的MaSp1(大壺狀腺絲蛋白1)蛋白的核酸，但只要是具有序列號1的堿基序列的核酸，則可以是由人工合成獲得的核酸，也可以是從基因組文庫或cDNA文庫獲得的核酸，還可以是用PCR對它們進行擴增而得到的核酸或者用限制酶將它們進行切斷而得到的核酸。

序列號2的氨基酸序列是橫紋金蛛的MaSp1蛋白所具有的氨基酸序列。