[發明專利]來源于前列腺分泌液中的前列腺癌標記物

在審

• 申請號: 201110268136.7
• 申請日: 2011-09-09
• 公開（公告）號: CN102998448A
• 公開（公告）日: 2013-03-27
• 發明（設計）人: 李潤生;林標揚;王健;劉媛媛
• 申請（專利權）人: 上海市計劃生育科學研究所;浙江大學
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 陳靜

技術領域

本發明屬于生物技術以及臨床診斷領域；更具體地，本發明涉及來源于前列腺分泌液中的前列腺癌標記物。

背景技術

目前診斷前列腺癌(PCa)主要的診斷標記物是PSA，但其臨床診斷上存在特異性和靈敏度不高的問題，導致臨床實踐中面臨大量不必要的活檢。這些問題一方面給病人帶來許多副作用，另外一方面造成醫療資源和費用的大量浪費。

早期診斷PCa、對確診的PCa有選擇地進行治療或單純隨訪觀察、避免過度治療是成功診治PCa的關鍵。目前在臨床上主要依靠PSA檢測、直腸指檢、影像學檢查和組織病理檢查等手段，但它們都存在一定的局限性，給早期PCa的確診、治療選擇和預后判斷帶來了一定困難。例如臨床上廣泛應用于早期診斷PCa的標志物為PSA，但是PSA特異性和敏感性都偏低。約15％PCa患者的血清PSA在正常范圍，前列腺炎和前列腺良性增生患者的PSA水平也會出現升高，而且PSA對判定PCa是否轉移及預后的作用不確切。

目前對前列腺癌評價，分型和預后基本還是停留在用Nomograms上(常用的是用Partin表)，主要指標大多是臨床指標，例如活檢的Gleason評分，臨床分期，血清中PSA水平進行綜合評價。在一個大規模的研究中，研究者發現Partin表預測淋巴結侵入，儲精囊侵入，前列腺胞外，或是局限在前列腺的癌癥等的檢測的AUC分別為0.77，0.74，0.62和0.68。因此，迫切需要尋找新的PCa標志物。

直接用血清來尋找癌癥標志物，具有很大的困難，也會碰到許多挑戰，即使在擁有先進質譜儀的狀況下，這種挑戰也仍然存在。因為血清里有幾種高豐度蛋白，如白蛋白、免疫球蛋白、補體因子，它們構成血清中97％的蛋白，而生物標記物通常是表達量相當低的蛋白。血清中蛋白的表達豐度是很大的，比如白蛋白的濃度是7.5×10⁵nmol/L；而PSA濃度在3ng/ml，相當于10^-1nmol/L，這說明PSA和白蛋白之間相差7.5×10⁶倍。目前，質譜所能檢測到的蛋白動態范圍只有10²-10⁴，遠遠不夠，即使利用蛋白抗體柱去除高豐度蛋白，成效仍然不明顯。即使去掉99％的蛋白，它的動態范圍仍然接近于10⁵。因此有必要從其他來源，尋找血清標記物。

和血液相比，作為用于前列腺癌臨床診斷的樣品，前列腺分泌液具有以下三方面優勢：1、理論上，前列腺液中的成分比血液中的成分更能直接、真實地反映前列腺癌的病理特點。2、前列腺液的來源具有高度的前列腺特異性。因此，前列腺分泌液(Expressed?Prostatic?Secretions，EPS)中所有的蛋白質(哪怕它們也存在于別的器官)都具有作為前列腺特異蛋白的資格用于新的前列腺臨床診斷癌標記蛋白的篩選。這無疑顯著地降低了篩選新的前列腺癌標記蛋白的難度。3、那些在血液中因水平極低而不易被發現的前列腺癌標記蛋白如果也在前列腺液中存在的話，則較容易被檢測出來。這一點對尋找早期前列腺癌標記蛋白無疑具有特別的意義，這是因為早期前列腺癌和晚期的相比，其體積很小，因而分泌物就更少。

本發明人在2008年率先對前列腺液進行了蛋白質組學研究和嚴格的過濾分析，共115種蛋白質成功地在前列腺分泌液鑒定出(Li?R等，Analysis?of?expressed?prostatic?secretions?reveals?rich?source?of?biomarker?candidates，Proteomics?Clinical?Application.2008；2：543-555)。和國外不同實驗室報道的前列腺癌組織轉錄水平的數據相比較，本發明人發現其中48種蛋白質的mRNA水平在前列腺癌組織也是增加的。隨后前列腺分泌液的蛋白質組得到了更深入的研究，也有更多的蛋白質被鑒定(Drake，R.R.，et?al.，Clinical?collection?and?protein?properties?of?expressed?prostatic?secretions?as?a?source?for?biomarkers?of?prostatic?disease.J?Proteomics，2009.72(6)：p.907-17；Drake，R.R.，et?al.，In-depth?proteomic?analyses?of?direct?expressed?prostatic?secretions.J?Proteome?Res，2010.9(5)：p.2109-16.)。