[發明專利]制備煙草浸出液的兩步微生物發酵法

有效

• 申請號: 201110267955.X
• 申請日: 2011-09-08
• 公開（公告）號: CN102440432A
• 公開（公告）日: 2012-05-09
• 發明（設計）人: 許贛榮;湯朝起;施林燕;于興偉;張晨;盛科
• 申請（專利權）人: 上海煙草集團有限責任公司;江南大學
• 主分類號: A24B15/20
• 分類號: A24B15/20
• 代理公司: 上海光華專利事務所 31219
• 代理人: 許亦琳;余明偉

1.一種制備煙草浸出液的兩步微生物發酵法，具體步驟為：

(1)酶解發酵：酶解型微生物對煙草原料的微生物發酵及酶解；

(2)固液分離：除去酶解產物中的不溶性固形物質，取酶解液進行濃縮，獲得濃縮酶解液；

(3)增香發酵：增香型微生物對濃縮酶解液進行微生物發酵，獲得煙草浸出液。

2.如權利要求1所述的兩步微生物發酵法，其特征在于，所述煙草原料選自煙梗、煙葉和煙末中的一種或多種。

3.如權利要求2所述的兩步微生物發酵法，其特征在于，所述煙草原料經粉碎、過篩處理，且處理后的煙草原料粒徑為大于等于60目，小于等于36目。

4.如權利要求1-3所述的兩步微生物發酵法，其特征在于，步驟(1)的酶解發酵步驟為：

A.酶解型微生物的菌種活化，利用煙草原料制備的種子培養基逐級擴大培養酶解型微生物種子；

B.采用固態或液態發酵法，將步驟A制備的酶解型微生物種子接種于煙草原料制備的發酵培養基中，在適宜條件下進行發酵和煙草原料的酶解，獲得酶解產物。

5.如權利要求4所述的兩步微生物發酵法，其特征在于，所述酶解型微生物為黑曲霉、米曲霉、黃孢原毛平革菌或木霉中任一。

6.如權利要求4所述的兩步微生物發酵法，其特征在于，步驟A中所述種子培養基是由煙草原料加水配置而成，其中煙草原料干基的重量百分比為6-8％。

7.如權利要求4所述的兩步微生物發酵法，其特征在于，步驟B所述的發酵培養基干基由煙葉粉末、煙末和煙梗粉末的干基組成，且三者的質量比為0.5∶0.5∶9。

8.如權利要求4所述的兩步微生物發酵法，其特征在于，步驟B所述的固態發酵法發酵培養基的料水比為發酵培養基干基質量∶水質量＝10∶9～12；所述液態發酵法發酵培養基的料水比為發酵培養基干基質量∶水質量＝1∶8～14。

9.如權利要求4所述的兩步微生物發酵法，其特征在于，步驟B所述的液態發酵法采用分批發酵法或補料分批發酵法。

10.如權利要求4所述的兩步微生物發酵法，其特征在于，步驟B固態發酵法發酵結束后，分離除去發酵產生的大量酶解型微生物的孢子，向發酵培養基中加入培養基濕基重量1～3倍的水進行酶解，酶解條件為45～50℃，酶解16～34h。

11.如權利要求4所述的兩步微生物發酵法，其特征在于，步驟B液態發酵法發酵培養條件為溫度30～33℃，培養4～6天。

12.如權利要求1所述的兩步微生物發酵法，其特征在于，步驟(2)所述濃縮酶解液中可溶性固形物質含量的質量百分比為8～50％。

13.如權利要求1-3所述的兩步微生物發酵法，其特征在于，步驟(3)的增香發酵步驟為：

a.種子的制備：增香型微生物菌種活化，利用煙草原料制備的種子培養基逐級擴大培養增香型微生物種子，收集細胞沉淀；

b.發酵：增香型微生物在適宜條件下對濃縮酶解液的生物轉化；

c.分離：發酵結束后，分離增香型微生物菌體與發酵液，收集增香后的發酵液；

d.再次發酵：向分離的增香型微生物菌體中加入新鮮煙草濃縮酶解液，重復步驟b和c的操作；

e.發酵液合并：不同批次增香后的發酵液合并得到煙草浸出液。

14.如權利要求13所述的兩步微生物發酵法，其特征在于，所述增香型微生物為酵母菌。

15.如權利要求13所述的兩步微生物發酵法，其特征在于，步驟a的種子培養基由麥芽汁和煙草原料溶液配制而成。

16.如權利要求13所述的兩步微生物發酵法，其特征在于，步驟a的增香型微生物種子的要求為種子液中增香型微生物細胞數達到10⁷～10⁸個/mL。

17.如權利要求13所述的兩步微生物發酵法，其特征在于，步驟b的發酵是向所述濃縮酶解液中加入增香型微生物濕細胞沉淀，制備成細胞懸液后進行生物轉化，且增香型微生物濕細胞沉淀在酶解濃縮液中的質量百分比為5～25％。