[發明專利]一種檢測植物根際微生物的熒光原位雜交方法有效
| 申請號： | 201110266857.4 | 申請日： | 2011-09-09 |
| 公開（公告）號： | CN102994614A | 公開（公告）日： | 2013-03-27 |
| 發明（設計）人： | 祝貴兵;王雨;尹澄清 | 申請（專利權）人： | 中國科學院生態環境研究中心 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12Q1/04;G01N21/64 |
| 代理公司： | 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245 | 代理人： | 關暢 |
| 地址： | 100085 *** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 檢測 植物 微生物 熒光 原位雜交 方法 | ||
1.一種用于檢測植物根際微生物的熒光原位雜交方法，包括如下步驟：
(1)植物根系片段的固定；
(2)熒光原位雜交；
其特征在于：所述步驟(1)和所述步驟(2)之間還包括如下步驟甲：將完成步驟(1)的植物根系片段用0.0001至0.1mol/L焦磷酸四鈉水溶液進行處理，然后棄去所述植物根系片段。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟甲中的處理條件為：20-30℃、15-60分鐘。
3.如權利要求2所述的方法，其特征在于：所述步驟甲中的處理條件為22℃、20分鐘；所述焦磷酸四鈉水溶液的濃度為0.001mol/L。
4.如權利要求1至3中任一所述的方法，其特征在于：所述方法還包括如下步驟乙：將完成所述步驟甲的溶液體系離心收集沉淀，用PBS緩沖液沖洗并懸浮。
5.如權利要求1至4中任一所述的方法，其特征在于：所述步驟(1)為：將所述植物根系片段浸泡于溶液甲中12小時；所述溶液甲是將3體積份固定液和1體積份3×PBS緩沖液混合得到的；所述固定液的pH為7.0-7.4，含有4g/100ml多聚甲醛。
6.如權利要求1至5中任一所述的方法，其特征在于：所述熒光原位雜交的條件為：46℃雜交1.5小時。
7.如權利要求1至6中任一所述的方法，其特征在于：所述熒光原位雜交所用的探針上具有熒光素標記；所述熒光素優選為FLUOS熒光素。
8.如權利要求1至7中任一所述的方法，其特征在于：所述熒光原位雜交所用的探針的核苷酸序列如序列表的序列1所示。
9.如權利要求8所述的方法，其特征在于：所述熒光原位雜交所用的探針的濃度為8.3pmol/μl。
10.如權利要求1至9中任一所述的方法，其特征在于：所述植物為燈芯草。
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