[發明專利]利用葉綠體制備豬圓環病毒Ⅱ型抗原的方法及其產品

有效

• 申請號: 201110266796.1
• 申請日: 2011-09-09
• 公開（公告）號: CN102311972A
• 公開（公告）日: 2012-01-11
• 發明（設計）人: 李軼女;張志芳;王金輝;程奇;王國增;沈桂芳;倪丕沖
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院生物技術研究所
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;C07K14/01;A61K39/12;A61P31/20;C12R1/89;C12R1/93
• 代理公司: 北京市德權律師事務所 11302
• 代理人: 余光軍

1.一種利用葉綠體制備豬圓環病毒Ⅱ型抗原的方法，包括：（1）構建豬圓環病毒Ⅱ型抗原基因的衣藻葉綠體表達載體；（2）將所構建的衣藻葉綠體表達載體轉化衣藻，篩選得到轉基因衣藻；(3)培養轉基因衣藻，收集所表達的重組蛋白，即得。

2.按照權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（1）中所述豬圓環病毒Ⅱ型抗原基因的核苷酸序列為SEQ?ID?NO.1?所示。

3.按照權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（1）中所述的豬圓環病毒Ⅱ型抗原基因衣藻葉綠體表達載體按照以下方法構建得到：（1）將豬圓環病毒Ⅱ型抗原基因置于衣藻葉綠體特異啟動子和終止子的調控之下組合得到豬圓環病毒Ⅱ型抗原基因表達盒；（2）將所組合的豬圓環病毒Ⅱ型抗原基因表達盒與衣藻葉綠體基因組中的同源片段進行同源重組，構建得到豬圓環病毒Ⅱ型抗原基因衣藻葉綠體表達載體。

4.按照權利要求1或3所述的方法，其特征在于：所述的豬圓環病毒Ⅱ型抗原基因衣藻葉綠體表達載體的微生物保藏號是：CGMCC?No.5170。

5.按照權利要求3所述的方法，其特征在于：所述的葉綠體特異啟動子包括prrn、atpA、atpB、psbA、psbD或rbcL；優選的，所述的prrn啟動子的核苷酸序列為SEQ?ID?NO.2所示；所述終止子的核苷酸序列為SEQ?ID?NO.3?所示。

6.按照權利要求3所述的方法，其特征在于：所述的衣藻葉綠體基因組中同源片段的核苷酸序列為SEQ?ID?NO.4所示。

7.按照權利要求1所述的方法，其特征在于：所述的豬圓環病毒Ⅱ型抗原基因衣藻葉綠體特異表達載體還含有選擇標記基因；優選的，所述選擇標記基因為細菌來源的抗菌素抗性基因，更優選為aadA基因。

8.按照權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（2）中所述的衣藻為萊茵衣藻（Chlamydomonas?reinhardtii）；優選為處于生長對數期后期的萊茵衣藻（Chlamydomonas?reinhardtii）CW-15；步驟（2）中所述的轉化方法為基因槍法。

9.由權利要求1-8任何一項所述方法制備得到的豬圓環病毒Ⅱ型抗原產品。

10.權利要求9所述的豬圓環病毒Ⅱ型抗原產品在制備預防或治療豬圓環病毒Ⅱ型藥物中的用途。