[發明專利]一種液態奶中小分子有毒有害物質的通用快速檢測方法

無效

• 申請號: 201110266512.9
• 申請日: 2011-09-08
• 公開（公告）號: CN102419354A
• 公開（公告）日: 2012-04-18
• 發明（設計）人: 湛嘉;王群威;鐘鶯鶯;陳杰;曹蘇仙;彭錦鋒;馮睿
• 申請（專利權）人: 寧波檢驗檢疫科學技術研究院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 寧波奧圣專利代理事務所(普通合伙) 33226
• 代理人: 程曉明

1.一種液態奶中小分子有毒有害物質的通用快速檢測方法，其特征在于具體包括以下步驟：

(1)樣品前處理及提取凈化

將液體牛奶加入試管中，并在試管中加入保護劑和乙腈-乙醇混合液，混勻后離心得到第一上清液，將第一上清液加入離心管中，并在離心管中加入乙腈-乙醇混合液，充分混勻后離心得到第二上清液，將第二上清液轉移至雞心瓶中于40℃旋轉蒸發至干，然后用乙腈-乙醇-水混合液定容得到樣品液，將樣品液搖勻后，通過0.22μm微孔濾膜過濾得到上樣液；

(2)混合標準溶液組成和基質標準曲線制備

A.混合標準溶液組成

氯霉素和β₂-激動劑類分別為20ng/mL，三聚氰胺、雙聚氰胺、納他霉素分別為2000ng/mL，阻斷劑、甲狀腺抑制劑、喹惡啉類、四環素類、喹諾酮類、磺胺類、β-內酰胺、咪唑類、噠唑類、咖啡因、抗寄生蟲藥類、阿維菌素類、性激素類、皮質激素、喹惡啉類、真菌毒素類、大環內酯類、非甾類消炎藥、β-內酰胺、鎮定劑、農藥殺蟲劑、染料類、雌激素、皮質激素、環境激素和農藥類(除草劑)均為200ng/mL，-18℃冷藏；

B.基質標準曲線定量

在4.0ml空白牛奶樣品中加入混合標準溶液0μL，20μL，40μL，80μL，160μL，320μL，按步驟(1)所述的樣品前處理及提取凈化方法進行處理，以濃度為橫坐標，儀器響應值為縱坐標，做基質加標標準曲線，作為試樣處理液中待測物濃度定量的依據，其中，響應值＝標準品峰面積/標準品質量；

(3)超高效液相色譜-三重四極桿串聯質譜聯用測定

A.高效液相分離

液相條件為：

a)色譜柱Acquity?Waters?HSS-T₃，2.1mm×100mm，1.8μm；

b)色譜柱溫度：40℃；

c)如果質譜采用Run1正離子模式進行測定，進樣量為將步驟(1)得到的上樣液稀釋4倍后取10μL；

如果質譜采用Run2正離子模式和Run3負離子模式進行測定，進樣量為步驟(1)得到的上樣液10μL；

d)流速：0.4mL/min

e)如果質譜采用Run3負離子模式進行測定，那么選擇流動相A₁：2.5mmol/L乙酸銨水溶液，流動相B₁：甲醇；梯度洗脫程序(以體積百分比記)為：0-6min，98-0％A₁；6-10min，0％A₁；10-10.5min，0-98％A₁；10.5-12min，98％A₁；各洗脫時間段中均以流動相B₁補足余下的％數；

如果質譜采用Run1正離子模式和Run2正離子模式進行測定，那么選擇流動相A₂：0.1％甲酸水溶液，流動相B₂：含0.1％甲酸的甲醇；梯度洗脫程序(以體積百分比記)為：0-2.3min，98-80％A₂；2.3-8min，80-0％A₂；8-10min，0％A₂；10-10.5min，0-98％A₂；10.5-12min，98％A₂；各洗脫時間段中均以流動相B₂補足余下的％數；

f)流路切換：0～0.55min切換閥打開，色譜柱流出液進入廢液，0.56min后開始質譜采集；

B.質譜檢測

質譜條件為：

a)采用電噴霧離子化電離源，毛細管電壓：正離子、負離子電壓分別為3.5kV和3.0kV；

b)多通道監測方式MRM：

c)離子源溫度：150℃，去溶劑氣溫度：450℃；

d)錐孔反吹氣流速：50L/h；去溶劑流速：700L/h

e)碰撞氣體：氬氣3.3×10^-3毫巴

g)分組方案：極性較強的藥物選擇Run1正離子模式下進行測定，Run1正離子模式定容溶劑為水、乙醇和乙腈按體積比為88∶6∶6的比例混合；極性偏弱藥物選擇Run2正離子模式下進行測定，Run2正離子模式定容溶劑為水、乙醇和乙腈按體積比為10∶5∶5的比例混合；極性和非極性的藥物選擇Run3負離子模式下進行測定，Run3負離子模式定容溶劑為水、乙醇和乙腈按體積比為10∶5∶5的比例混合；

(4)濃度計算方法

樣品中待測物的含量根據如下計算公式(1)得到：

X=C×V×1000m×1000...(1)]]>

式中：

X-試樣中待測物含量，單位為微克每公斤(μg/L)；

C-試樣處理液中待測物濃度，根據基質標準曲線計算得到，單位為納克每毫升(ng/mL)；

V-定容體積，單位為毫升(mL)；

m-試樣體積，單位為毫升(mL)。