[發明專利]β-葡聚糖內切酶PEGase-1基因及其表達產物和應用

無效

• 申請號: 201110266138.2
• 申請日: 2011-09-08
• 公開（公告）號: CN102311965A
• 公開（公告）日: 2012-01-11
• 發明（設計）人: 邢苗;劉士德;張建華;李小青;田生禮;歐陽秋玲
• 申請（專利權）人: 深圳大學
• 主分類號: C12N15/56
• 分類號: C12N15/56;C12N15/63;C12N1/21;C12N1/15;C12N1/19;C12N9/42;C12R1/885;C12R1/19;C12R1/84
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 何平

1.一種β-葡聚糖內切酶PEGase-1基因，其特征在于，包括如下序列：

(a)、編碼由SEQ?ID?No.1所示的氨基酸序列組成的多肽的多核苷酸，或者所述多核苷酸的互補鏈；

(b)、和編碼由SEQ?ID?No.1所示的氨基酸序列組成的多肽的多核苷酸具有至少98％同源性的多核苷酸，或者所述多核苷酸的互補鏈；

(c)、編碼多肽的多核苷酸或所述多核苷酸的互補鏈，所述多肽由SEQ?IDNo.1所示的氨基酸序列組成，其中一個或多個氨基酸被缺失、替代或增加，且所述多肽具有β-葡聚糖內切酶活性；或

(d)、編碼多肽的多核苷酸或所述多核苷酸的互補鏈，所述多肽與由SEQ?IDNo.1所示的氨基酸序列組成的多肽具有至少98％的同源性。

2.一種β-葡聚糖內切酶PEGase-1基因，其特征在于，包括如下序列：

(a)、由SEQ?ID?No.2所示的核苷酸序列組成的多核苷酸，或者所述多核苷酸的互補鏈；

(b)、和編碼由SEQ?ID?No.2所示的核苷酸序列組成的多核苷酸具有至少98％同源性的多核苷酸，或者所述多核苷酸的互補鏈；或

(c)、編碼多肽的多核苷酸或所述多核苷酸的互補鏈，所述多核苷酸序列由SEQ?ID?No.2所示的核苷酸序列組成，其中一個或多個密碼子被缺失、替代或增加，所述多肽具有β-葡聚糖內切酶活性。

3.如權利要求2所述的β-葡聚糖內切酶PEGase-1基因，其特征在于，所述β-葡聚糖內切酶PEGase-1基因包括由SEQ?ID?No.2所示的核苷酸序列組成的多核苷酸。

4.一種基因表達載體，其特征在于，包括如權利要求1或2所述的β-葡聚糖內切酶PEGase-1基因。

5.一種宿主細胞，其特征在于，包括如權利要求4所述的基因表達載體，所述宿主細胞為真核生物細胞。

6.如權利要求5所述的宿主細胞，其特征在于，所述真核生物細胞為酵母細胞或里氏木霉細胞。

7.一種蛋白質的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟一、提供如權利要求5所述的宿主細胞，誘導表達得到表達液；

步驟二、利用40％和70％的飽和硫酸銨將所述表達液分級沉淀，分離粗產物；

步驟三、利用HiTrap^TM?Capto^TM?Q離子交換層析膠純化粗產物，得到所述蛋白質。

8.一種蛋白質，其特征在于，包括如下序列：

(a)、由SEQ?ID?No.1所示的氨基酸序列組成的多肽；

(b)、和由SEQ?ID?No.1所示的氨基酸序列組成的多肽具有至少98％同源性的多肽；或

(c)、由SEQ?ID?No.1所示的氨基酸序列組成的多肽，其中一個或多個氨基酸被缺失、替代或增加，且所述多肽具有β-葡聚糖內切酶活性。

9.一種酶制劑，其特征在于，包括如權利要求8所述的蛋白質；所述酶制劑用于水解β-1，3(4)-葡聚糖。

10.如權利要求9所述的酶制劑，其特征在于，所述酶制劑還包括用于提高酶活性的金屬陽離子。