[發明專利]無動物源凍精稀釋液

無效

• 申請號: 201110264510.6
• 申請日: 2011-09-08
• 公開（公告）號: CN102986647A
• 公開（公告）日: 2013-03-27
• 發明（設計）人: 張世偉;劉興偉;宋先忱;韓迪
• 申請（專利權）人: 遼寧省遼寧絨山羊原種場有限公司
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域：

本發明涉及一種制作牛、羊凍精時使用的用無動物來源成份配制的凍精稀釋液。

背景技術：

目前，在制作牛、羊凍精時，需用稀釋液對精液進行稀釋，而目前使用的凍精稀釋液，都含有動物來源成份(含有卵黃、奶類等)，用其制作的凍精解凍后精子活力低，存活時間短，細管凍精的頂體完整率低，病源微生物數量多。在原精活力為70％的前提下，凍精解凍后精子活力在30～50％，平均活力只有45％，在38℃的平均存活時間為4～7小時，解凍后細管凍精的頂體完整率平均在65％以下，24小時培養后病源微生物的數量平均在600～1200個菌落數。

發明內容：

本發明所要解決的技術問題是提供一種無動物源凍精稀釋液，用該稀釋液制作的凍精解凍后精子活力高，存活時間長，細管凍精的頂體完整率高，病源微生物數量少。

上述目的是這樣實現的：所述的無動物源凍精稀釋液由下列成份按如下質量比配制而成：乳糖3.412克，蔗糖0.5克，葡萄糖0.9克，海藻糖0.61克，檸檬酸0.53克，乙二酸四乙胺0.403克，三羥甲基氨基甲烷1.425克，檸檬酸三鈉0.375克，乙二醇5.2毫升，雙蒸水100毫升，粉沫磷脂0.88克。

具體配制方法如下：將所述的乳糖、蔗糖、葡萄糖、海藻糖、檸檬酸、乙二酸四乙胺、三羥甲基氨基甲烷、檸檬酸三鈉、乙二醇、放入三角燒瓶內，加入雙蒸水，加熱至95℃，使上述藥品完全溶解，降溫至35℃時，加入粉沫磷脂，攪拌30分鐘，再降溫至4℃，并在4℃環境中靜置存放12小時，用濾紙濾除溶液中的沉淀物，即可使用。

本發明的優點是：用該稀釋液制作的凍精解凍后精子活力高，存活時間長，細管凍精的頂體完整率高，病源微生物數量少。在原精活力為70％的前提下，平均解凍后活力在58％以上，最高解凍活力達68％，解凍后在38℃環境中存活時間平均在11個小時以上，最長存活時間超過24小時，解凍后細管凍精的平均頂體完整率在72.8％以上，解凍后的凍精經48小時培養，病源微生物菌落數少于130個，如果采精時保證原精和操作過程中無病源微生物污染，則制作的細管凍精經培養后就不會有病源微生物存在；應用此稀釋液所制凍精，可以避免因稀釋液帶有病源微生物而在牛羊之間、牛羊與人之間相互傳播，從而有效降低了人畜共患疫病的風險。

具體實施方式：

所述的無動物源凍精稀釋液由下列成份按如下質量比配制而成：乳糖3.412克，蔗糖0.5克，葡萄糖0.9克，海藻糖0.61克，檸檬酸0.53克，乙二酸四乙胺0.403克，三羥甲基氨基甲烷1.425克，檸檬酸三鈉0.375克，乙二醇5.2毫升，雙蒸水100毫升，粉沫磷脂0.88克；

具體配制方法如下：將所述的乳糖、蔗糖、葡萄糖、海藻糖、檸檬酸、乙二酸四乙胺、三羥甲基氨基甲烷、檸檬酸三鈉、乙二醇、放入三角燒瓶內，加入雙蒸水，加熱至95℃，使上述藥品完全溶解，降溫至35℃時，加入粉沫磷脂，攪拌30分鐘，再降溫至4℃，并在4℃環境中靜置存放12小時，用濾紙濾除溶液中的沉淀物，即可使用。

其中乳糖、蔗糖、葡萄糖、海藻糖、檸檬酸、乙二酸四乙胺、三羥甲基氨基甲烷、檸檬酸三鈉、乙二醇均為化學分析純試劑，雙蒸水的PH值為6.9。

其中粉沫磷脂是指由北京華清美恒公司生產的大豆卵磷脂，具體指標如下：產品型號為PLW，外觀形態為淺黃色粉沫，水份及揮發物≤1.0％，丙酮不溶物≥98％，乙醚不溶物≤0.1％，酸價(mgKOH/g)≤35，過氧化值≤12。

其中檸檬酸三鈉是含有兩個結晶水的檸檬酸三鈉。

用該無動物源凍精稀釋液制作凍精的方法：

1.精液稀釋：

在使用前，將配制好的無動物源凍精稀釋液水浴加溫至35℃，再將采集的精液與無動物源凍精稀釋液按1∶2～1∶15進行稀釋。

2.降溫平衡：

將稀釋好的精液以每分鐘約0.5℃的速度降溫至0～5℃，存放0.5小時，然后在此溫度下進行灌裝。

3.冷凍：

將灌裝好的細管凍精放置于-95±5℃的溫度下進行冷凍，3分鐘后經檢測合格投入液氮中保存。

4.細管凍精解凍：

從液氮中取出細管凍精，迅速投入到38～40℃的溫水中，使水面浸沒凍精細管，至細管凍精剛變為透明時取出，在200～600倍的顯微鏡下觀察。用該無動物源凍精稀釋液制作細管凍精解凍后的配種效果：

牛羊在排卵期采用子宮頸口輸精法配種，一個情期輸精2次，間隔12小時，受胎效果為：牛平均為97％以上，羊為76％以上。牛的受胎率比用含有動物來源的稀釋液所制凍精配種的受胎率平均提高5～7％，羊的受胎率比用含有動物來源的稀釋液所制凍精配種的受胎率平均提高10～16％。