[發明專利]一種測定金屬蛋白中金屬離子含量的方法

有效

• 申請號: 201110264240.9
• 申請日: 2011-09-08
• 公開（公告）號: CN102393365A
• 公開（公告）日: 2012-03-28
• 發明（設計）人: 劉紅星;張揚;劉利波;齊連權;賈慧;劉玉靜;周麗瑩;肖萱
• 申請（專利權）人: 北京泰德制藥股份有限公司
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N1/28
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技術領域

本發明涉及一種測定金屬蛋白中金屬離子含量的方法，確切地說，是關于一種通過樣品的前處理來準確定量金屬蛋白中金屬離子含量的方法。?

背景技術

金屬蛋白是由蛋白質和金屬離子結合形成的。其中多數金屬離子僅和蛋白質連接；少數除和蛋白質相連外，還和一個較小的分子相連，如血紅蛋白中的鐵（Ⅱ）除和蛋白質相連外，還和卟啉環相連。金屬蛋白質有重要的生理功能，如血紅蛋白為運送氧所必需；銅藍蛋白能催化鐵（Ⅱ）的氧化，以利于鐵（Ⅲ）和蛋白質結合形成運鐵蛋白，運鐵蛋白用于運送鐵等。?金屬蛋白中金屬離子的含量對生物體功能具有至關重要的作用，近年來的研究表明許多神經退行性疾病與金屬離子（Cu、Fe、Zn、Mn）和金屬蛋白緊密相關。這可能是與在大腦中這些所謂的“微量元素”有較高的含量密切相關。近年來發現家族性肌萎縮性脊髓側索硬化癥與含銅鋅的超氧化物歧化酶SOD氧化抗壞血酸能力的提高有關，由于SOD的蛋白突變使得Cu/Zn-SOD中Zn²⁺的結合能力降低，使其Zn²⁺丟失，導致SOD1的氧化抗壞血酸的能力要比正常的SOD高3000倍，因此，能夠準確定量出金屬蛋白中的金屬離子含量對于生物醫藥的發展和研究具有重要的意義。?

目前，金屬蛋白中金屬離子含量的測定方法是按照2010年版中國藥典附錄三部ⅡB原子吸收分光光度法進行的，該方法對樣品溶液直接進樣，通過霧化器霧化成氣溶膠后，再與燃氣混合，進入燃燒燈頭產生的火焰中，以干燥、蒸發、離解供試品，使待測元素形成基態原子。通過繪制標準曲線，計算出金屬元素的含量。由于對供試品進行分析的儀器目前主要為原子吸收光譜儀和電弧光源發射光譜儀，樣品在儀器中霧化的時間比較長，而且不能保證金屬蛋白中離子完全脫落，金屬離子的不完全脫落會造成每次進行樣品分析時的重復性和準確度比較低；由于不同儀器之間霧化能力的差異導致同一樣品在不同型號，甚至是相同型號的儀器中分析結果差異很大；直接進樣的樣品在霧化器及燃燒燈頭中霧化時金屬離子脫落的過程耗時長，對氣態流動相的消耗量大、加快了儀器中精密部件的損耗，對研究開發帶來不便的同時也增加科研項目的開發成本。?

發明內容

為了提高金屬蛋白中金屬離子定量的準確度和方法的重復性，同時縮短分析時間，降低科研成本，本發明人經過潛心的研究發現，通過將供試品的金屬蛋白樣品溶液經過酸性物質處理，使其供試品溶液的pH值小于5時再進樣分析，可以克服目前金屬蛋白中金屬離子測定的缺點，對生物領域中分析技術的提高起到了促進作用。?

本發明的目的是提供一種測定金屬蛋白中金屬離子含量的方法。?

為實現上述發明目的，本發明采用了如下技術方案：?

一種測定金屬蛋白中金屬離子含量的方法，該方法是將樣品進行前處理后再通過原子吸收光譜儀或原子發射光譜儀進行測定。

樣品的前處理方法為用酸性物質配制或處理樣品，使樣品溶液的pH值小于5。?

其中，前處理方法使用的酸性物質由硝酸、硫酸、醋酸、三氟乙酸、鹽酸、亞硫酸、亞硝酸中的一種或一種以上組合而成。?

所測定的金屬蛋白為含有過渡金屬元素或堿土金屬元素的金屬蛋白。?

過渡金屬蛋白中含有的金屬元素包括Cu離子、Zn離子、Mn離子、Fe離子、Co離子、Mo離子中的一種或多種，優選為含有Cu離子和Zn離子的金屬蛋白，例如Cu-ZnSOD蛋白、乙醇脫氫酶、血紅蛋白。?

堿土金屬蛋白中含有的金屬元素包括Mg離子或Ca離子中的一種或兩種，優選為含有Ca離子的金屬蛋白，例如鈣調素蛋白等。?

與現有技術相比，本發明至少具有以下有益效果：?

（1）????提高了目前金屬蛋白中金屬離子定量的準確度；

（2）????酸性物質使金屬蛋白中金屬離子完全脫落，提高了樣品分析的精密度和重現性；

（3）????縮短了樣品溶液在儀器中的霧化處理時間，提高了分析效率；

（4）????減少了樣品分析對儀器精密部件的損耗，減少了氣態流動相的用量，節省了項目研究開發的成本。

附圖說明：

圖1為Cu標準液與吸光度曲線。

圖2為Zn標準液與吸光度曲線。?

具體實施方式:

顯然，根據本發明的上述內容，按照本領域的普通技術知識和慣用手段，在不脫離本發明上述基本技術思想的前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。