[發明專利]酵母展示型聚半乳糖醛酸酶協同超聲波處理提取紫菜多糖的方法無效
| 申請號: | 201110263958.6 | 申請日: | 2011-09-07 |
| 公開(公告)號: | CN102286110A | 公開(公告)日: | 2011-12-21 |
| 發明(設計)人: | 阮暉;張延;郭子堃;徐娟;周陳偉;杜姍姍;楊璐;何國慶 | 申請(專利權)人: | 浙江大學 |
| 主分類號: | C08B37/00 | 分類號: | C08B37/00;C12S3/02;C12N15/55;C12N15/81;C12N9/16 |
| 代理公司: | 杭州天勤知識產權代理有限公司 33224 | 代理人: | 胡紅娟 |
| 地址: | 310027 浙*** | 國省代碼: | 浙江;33 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 酵母 展示 半乳糖 醛酸 協同 超聲波 處理 提取 紫菜 多糖 方法 | ||
1.一種酵母展示型聚半乳糖醛酸酶協同超聲波處理提取紫菜多糖的方法,包括:
將紫菜干粉、酵母展示型聚半乳糖醛酸酶加入水中混勻,于35~37℃攪拌反應30~45分鐘,再于28~35℃利用功率為730~750W的超聲波破碎1~2小時,得到細胞破碎液,分離純化制得紫菜多糖;
所述的酵母展示型聚半乳糖醛酸酶通過如下方法制備:
將經線性化處理的重組質粒轉入畢赤酵母(Pichia?pastoris)GS115,將所得轉化子接種于BMMY培養基中,誘導培養72~144小時后離心收集菌體,菌體經沖洗和冷凍干燥制得酵母展示型聚半乳糖醛酸酶;
所述的重組質粒由原始載體pPIC9K和依次插入原始載體pPIC9K中MFα1信號肽下游的聚半乳糖醛酸酶基因、畢赤酵母GS115的細胞壁α凝集素基因組成。
2.根據權利要求1所述的方法,其特征在于:所述的紫菜干粉的粒徑為60~100目。
3.根據權利要求1所述的方法,其特征在于:以每克紫菜干粉計,所述的酵母展示型聚半乳糖醛酸酶的加入量為0.05~0.08g。
4.根據權利要求1所述的方法,其特征在于:所述的攪拌速率為100~200轉/分鐘。
5.根據權利要求1所述的方法,其特征在于:所述的分離純化包括:對細胞破碎液進行離心處理,取上清液,上清液經鹽析、去沉淀后得到紫菜多糖。
6.根據權利要求5所述的方法,其特征在于:所述的鹽析包括:在上清液中加入硫酸銨,于3~5℃靜置11~13小時;其中,所述的硫酸銨的加入量以每升上清液計為200~250g。
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