[發明專利]檢測腦炎類病毒的ELISA-Array方法及其專用試劑盒

無效

• 申請號: 201110263488.3
• 申請日: 2011-09-07
• 公開（公告）號: CN102426237A
• 公開（公告）日: 2012-04-25
• 發明（設計）人: 康曉平;李裕昌;楊銀輝;林方;范麗;魏婧靖;戶義;李靖;常國輝;祝慶余
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事醫學科學院微生物流行病研究所
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/569;G01N33/543;G01N21/76
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其涉及一種檢測腦炎類病毒的ELISA-Array方法及其專用試劑盒。

背景技術

我國是腦炎類病毒危害嚴重的國家，正確診斷致病菌是有效控制其傳播的基礎，也是進行有效治療的關鍵。我國所流行的腦炎類病毒性病原體，主要包括：日本乙型腦炎病毒(Japanese?Encephalitis?virus，JEV)、蜱傳腦炎病毒(Tick?borne?encephalitis?virus，TBE)、東部馬腦炎病毒(Eastern?equine?encephalitis?virus，EEEV)、辛德比斯病毒(Sindbis?Virus)、登革病毒(Dengue?virus，DV)等，均為蟲媒傳播的病毒，其中日本乙型腦炎病毒(Japanese?Encephalliis?virus，JEV)、蜱傳腦炎病毒(Tick?borne?encephalitis?virus，TBE)、東部馬腦炎病毒(Eastern?equine?encephalitis?virus，EEEV)可引起嚴重的腦炎癥狀，并具有較高的致死率，辛德比斯病毒(Sindbis?Virus)和登革病毒(Dengue?virus，DV)的臨床癥狀較為輕微，針對以上病原體，臨床上應采取不同的治療手段和防控措施，但以上病毒均為蟲媒傳播，早期均有相似的癥狀，因此，建立準確的早期診斷方法，對于腦炎類病毒病的防控具有重要價值。

目前已有多種可同時檢測多種抗原的技術方法，包括雙相凝膠電泳、蛋白芯片、質譜、液相懸浮芯片技術等。然而，由于操作復雜、成本高，這些技術難以進行臨床應用。

ELISA-Array技術是一種新型檢測系統，它在傳統ELISA技術基礎上發展而來，集合了酶聯免疫分析(ELISA)和微陣列(Array)技術而形成的新一代檢測技術體系。既秉承了蛋白芯片技術高通量、高平行的特點；同時該技術還保持ELISA方法的成熟、操作簡便、成本低的優勢，針對病原體的ELISA-Array技術檢測，國內尚無其他單位研究。

該技術將各種抗體由大規模全自動點樣設備以微陣列的形式排布于微孔板板孔內，可用于同時檢測多種病原體，數十倍提高了ELISA檢測的通量。由于每個微孔實現了一份樣本的多種檢測，使用中減少了臨床標本和檢測試劑的用量。

在操作技術上，該技術流程與傳統ELISA方法基本相同，所用耗材為96孔酶聯板，儀器為酶聯自動洗板儀、酶聯反應儀，可用排槍加樣，反應過程中所用試劑也與傳統ELISA相同。僅在顯色和結果讀取過程與傳統ELISA有差異。以化學發光試劑代替了傳統ELISA中所使用的TMB(或DAB)底物，從而進一步放大信號，以芯片閱讀儀檢測實驗結果，代替了酶聯檢測儀。因此，使用單位可沿用大部分已有的ELISA相關儀器，且技術人員不需要很高的專業背景和復雜的操作培訓，易于基層檢測單位的接受和推廣。

目前，國內外僅有ELISA-Array技術用于腫瘤標志物的研究報道，尚未用于傳染病的檢測。

發明內容

本發明的一個目的是提供一種檢測腦炎類病毒的抗體組。

本發明提供的抗體組，包括6種捕獲抗體；

所述6種捕獲抗體分別為抗日本乙型腦炎病毒的抗體4D5、抗蜱傳腦炎病毒的抗體2B5、抗辛德比斯病毒的抗體1F1、抗登革病毒2型的抗體2B8、抗登革病毒4型的抗體4F9和抗東部馬腦炎病毒的抗體4E11。

所述每種捕獲抗體均以捕獲抗體溶液的形式存在；

每種所述捕獲抗體溶液均按照如下方法制備：將所述捕獲抗體與點樣液混合得到的捕獲抗體溶液，所述捕獲抗體在對應的所述捕獲抗體溶液中的濃度為0.025mg/ml-0.2mg/ml；

所述點樣液按照如下方法制備：將甘油、Triton-X100和濃度為0.01M、PH為7.2的磷酸鹽緩沖液混合，得到點樣液，所述甘油在所述點樣液中的濃度為15％-25％(體積百分含量)，所述Triton-X100在所述點樣液中的濃度為0.001％-0.006％(體積百分含量)。

所述捕獲抗體2B8、4D5、2B5、4E111和1F1在對應的所述捕獲抗體溶液中的濃度均為0.05mg/ml，所述捕獲抗體4F9在對應的所述捕獲抗體溶液中的濃度為0.1mg/ml；

所述甘油在所述點樣液中的濃度為20％(體積百分含量)，所述Triton-X100在所述點樣液中的濃度為0.004％(體積百分含量)。