[發明專利]一種表達REV env的重組MDV毒株的構建和應用

有效

• 申請號: 201110263022.3
• 申請日: 2011-09-07
• 公開（公告）號: CN102344914A
• 公開（公告）日: 2012-02-08
• 發明（設計）人: 陳瑞愛
• 申請（專利權）人: 肇慶大華農生物藥品有限公司;廣東大華農動物保健品股份有限公司
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N15/09;C12N15/48;A61K39/295;A61K39/21;A61K39/245;A61P31/14;A61P31/22;C12R1/93
• 代理公司: 北京君智知識產權代理事務所 11305
• 代理人: 鄭明

技術領域本發明涉及一種表達REV?env的重組MDV毒株的構建和應用，屬于獸用生物制品分子生物學領域。?

背景技術

腫瘤是種雞和商品蛋雞的常發病，雖然其發病率和死亡率不高，但造成的經濟損失很大，主要原因是致腫瘤病毒對雞體所引起的免疫抑制，并進而導致對各種疫苗免疫應答的下降。近幾年來，在我國雞群中腫瘤病的發生率又有抬頭的趨勢。?

雞群中可引起腫瘤的病毒有三種，即馬立克氏病病毒(Marek’s?disease?virus，MDV)、雞白血病病毒(Avian?leucosis?virus，ALV)和禽網狀內皮增生病病毒(Reticuloendotheliosis?viruses，REV)。長期以來，在雞群中只要一出現腫瘤，就懷疑甚至斷言是馬立克氏病，而忽視了其它二種病毒的致病性。ALV的A、B、C、D亞型可在蛋用雞中誘發腫瘤，而ALV的J亞群則主要在肉用型種雞中誘發腫瘤。REV則在蛋用型和肉用型雞中均可誘發腫瘤。?

根據臨床病理變化和流行病學特點，雖然可以區別一些典型的馬立克氏病或白血病，但近幾年來雞群中實際發生的腫瘤的表現在逐漸變化，已很難僅僅根據病變來鑒別診斷究竟哪一種病毒引發的腫瘤。特別是，在同一雞群中及同一病雞中，二種不同病毒共感染的現象非常普遍，這更給鑒別診斷帶來了難度。?

禽網狀內皮增生病病毒(REV)，這是另一種反轉錄病毒，可自然感染多種鳥類，在自然界分布廣泛。REV可能通過雞胚發生垂直感染，垂直感染或早期感染的雛雞，最易發生矮小綜合癥和免抑制綜合癥，同時也會誘發腫瘤。很難根據臨床病變與MDV或ALV腫瘤相區別。目前，我國雞群中REV感染相當普遍，毫無疑問，有一定比例的腫瘤與REV感染有關。?

近二、三年中，即使在一些已用MDV?CV1988/Rispens株液氮苗(本發明又簡稱CV1988疫苗)免疫的雞群，仍有腫瘤發病率抬頭的趨勢。由于人們仍把它歸罪于MDV，因此許多人都推測，是否出現了特超強毒型的流行株。但迄今為止，國內外尚未能實驗證明這一點。然而，從這類雞場的腫瘤病雞，通過病毒分離，已發現有相當比例病雞存在著MDV和REV的共感染。此外，在用REV和MDV二種病毒同時作人工感染試驗中，也確實能誘發不同細胞類型的腫瘤結節。?

由于REV感染在我國雞群上已相當普遍，有分析認為，REV的共感染是造成CV1988疫苗?免疫雞群中腫瘤發病率升高的重要原因。由于在一些雞的REV感染造成免疫抑制，也引起了由CV1988疫苗誘發的保護性免疫下降，因而造成免疫雞群仍有腫瘤發生。?

本實驗室追蹤近5年廣州地區養殖雞群中REV的感染情況，結果表明，REV在我省雞群中的感染率從0到100％，平均約為20％。人工感染實驗表明，REV對雛雞有很強的免疫抑制作用，它既顯著抑制中樞性免疫器官胸腺和法氏囊的發育，也顯著抑制感染雞對NDV和AIV疫苗免疫后的抗體反應，其中，對禽流感(Avian?influenza?virus，AIV)疫苗免疫的抑制作用更為顯著(孫淑紅，崔治中等，中國病毒學(英文版)，2006；李延鵬，崔治中等，中國獸醫學報，2008)。已有的比較實驗表明，相對于其它免疫抑制性病毒，如MDV，CAV，ARV，ALV等，REV對雞表現出的免疫抑制作用最強(柳鳳祥，崔治中等，中國農業科學，2009)。REV單獨感染時可以表現出很強的免疫抑制作用，在與其它病毒共感染時，這種免疫抑制作用還會進一步加強，表現出的免疫抑制更為嚴重。以對AIV-H5疫苗的免疫反應為例，兩種病毒的共感染均顯著地抑制對疫苗的免疫反應。?

已有的研究結果對REV疫苗提出了迫切的要求，然而到目前為止，竟未出現一種REV疫苗產品問世！由于REV是反轉錄病毒，使用活疫苗存在轉染進宿主細胞基因組的潛在風險；而REV的增殖速度又決定了目前無法通過大量培養REV以滿足滅活疫苗的生產需要。因此通過基因工程手段表達REV的免疫保護性基因，制造重組基因工程疫苗是解決這一問題的良好方法。?