[發(fā)明專利]用于指導(dǎo)氟脲嘧啶類藥物個(gè)體化治療的基因組合

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110261582.5
• 申請(qǐng)日: 2011-09-06
• 公開（公告）號(hào): CN102329863A
• 公開（公告）日: 2012-01-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 樓敬偉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海寶藤生物醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一組用于指導(dǎo)氟脲嘧啶類藥物個(gè)體化治療的基因組合，其特征在于該基因組合包含：DPYD*2A，DPYD*5A，DPYD*9A，MTHFR，TS，GSTP1基因。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基因組合，其特征在于針對(duì)DPYD*2A位點(diǎn)設(shè)計(jì)的正向引物序列為：CATTGTGACAAATGTTTCCC(SEQ?ID?No.1)，反向引物序列為：ATCAGCAAAGCAACTGGCA(SEQ?ID?No.2)；針對(duì)DPYD*5A位點(diǎn)設(shè)計(jì)的正向引物序列為：TCTGCCAAGCCTGAACTAC(SEQ?ID?No.3)，反向引物序列為：AGAGAAAGTTTTGGTGAGGG(SEQ?ID?No.4)；針對(duì)DPYD*9A位點(diǎn)設(shè)計(jì)的正向引物序列為：CTGTCTTTAGAGTATCCTGGC(SEQ?ID?No.5)，反向引物序列為：CACGGCTGTACTTTAATACC(SEQ?ID?NO.6)；針對(duì)MTHFR位點(diǎn)設(shè)計(jì)的正向引物序列為：AGGACAGTGTGGGAGTTTGG(SEQ?ID?No.7)，反向引物序列為：GAAAAGCTGCGTGATGATGA(SEQ?ID?NO.8)；針對(duì)TS位點(diǎn)設(shè)計(jì)的正向引物序列為：GTGGCTCCTGCGTTTCCCCC??(SEQ?ID?No.9)，反向引物序列為：GGCTCCGAGCCGGCCACAGGCATGGCGCGG(SEQ?ID?NO.10)；針對(duì)GSTP1位點(diǎn)設(shè)計(jì)的正向引物序列為：CTGCTGTGTGGCAGTCTCTC(SEQ?ID?No.11)，反向引物序列為：CCGTTACTTGGCTGGTTGAT(SEQ?ID?NO.12)。

3.如權(quán)利要求2所述的引物序列在檢測(cè)其相應(yīng)的基因突變中的應(yīng)用。

4.如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于檢測(cè)方法如下：

4.1提取病人腫瘤組織基因組DNA；

4.2以待測(cè)腫瘤組織基因組DNA為模板，用權(quán)利要求2所述的擴(kuò)增引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增；

4.3PCR擴(kuò)增產(chǎn)物凝膠電泳分析；

4.4PCR擴(kuò)增產(chǎn)物測(cè)序。

5.如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于所述步驟(4.2)中PCR反應(yīng)體系每20μl組成如下：待測(cè)病人腫瘤組織基因組DNA?50～100ng，Taq酶0.125μl，上下游引物(10μM)各1μl，dNTP(2.5mM)2μl，10×PCR緩沖液(含Mg²⁺)2μl，余下為無菌蒸餾水。

6.如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于所述步驟(4.2)中用于檢測(cè)DPYD*2A的PCR擴(kuò)增反應(yīng)條件是：95℃預(yù)變性2min，隨后95℃變性30sec，57℃退火30sec，72℃延伸30sec，進(jìn)行40個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸7min，4℃保存。

7.如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于所述步驟(4.2)中用于檢測(cè)DPYD*5A的PCR擴(kuò)增反應(yīng)條件是：95℃預(yù)變性2min，隨后95℃變性30sec，57℃退火30sec，72℃延伸30sec，進(jìn)行40個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸7min，4℃保存。

8.如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于所述步驟(4.2)中用于檢測(cè)DPYD*9A的PCR擴(kuò)增反應(yīng)條件是：95℃預(yù)變性2min，隨后95℃變性30sec，57℃退火30sec，72℃延伸30sec，進(jìn)行40個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸7min，4℃保存。

9.如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于所述步驟(4.2)中用于檢測(cè)MTHFR的PCR擴(kuò)增反應(yīng)條件是：95℃預(yù)變性2min，隨后95℃變性30sec，58℃退火30sec，72℃延伸30sec，進(jìn)行40個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸7min，4℃保存。

10.如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于所述步驟(4.2)中用于檢測(cè)TS的PCR擴(kuò)增反應(yīng)條件是：95℃預(yù)變性2min，隨后95℃變性30sec，58℃退火30sec，72℃延伸30sec，進(jìn)行40個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸7min，4℃保存。

11.如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于所述步驟(4.2)中用于檢測(cè)GSTP1的PCR擴(kuò)增反應(yīng)條件是：95℃預(yù)變性2min，隨后95℃變性30sec，55℃退火30sec，72℃延伸1min，進(jìn)行40個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸7min，4℃保存。

12.如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于所述步驟(4)中測(cè)序PCR擴(kuò)增的反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性4min，隨后95℃變性30sec，50℃退火15sec，進(jìn)行35個(gè)循環(huán)，最后60℃延伸4min，4℃保存。