[發明專利]用于指導氟脲嘧啶類藥物個體化治療的基因組合

無效

• 申請號: 201110261582.5
• 申請日: 2011-09-06
• 公開（公告）號: CN102329863A
• 公開（公告）日: 2012-01-25
• 發明（設計）人: 樓敬偉
• 申請（專利權）人: 上海寶藤生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一組用于指導氟脲嘧啶類藥物個體化治療的基因組合，其特征在于該基因組合包含：DPYD*2A，DPYD*5A，DPYD*9A，MTHFR，TS，GSTP1基因。

2.根據權利要求1所述的基因組合，其特征在于針對DPYD*2A位點設計的正向引物序列為：CATTGTGACAAATGTTTCCC(SEQ?ID?No.1)，反向引物序列為：ATCAGCAAAGCAACTGGCA(SEQ?ID?No.2)；針對DPYD*5A位點設計的正向引物序列為：TCTGCCAAGCCTGAACTAC(SEQ?ID?No.3)，反向引物序列為：AGAGAAAGTTTTGGTGAGGG(SEQ?ID?No.4)；針對DPYD*9A位點設計的正向引物序列為：CTGTCTTTAGAGTATCCTGGC(SEQ?ID?No.5)，反向引物序列為：CACGGCTGTACTTTAATACC(SEQ?ID?NO.6)；針對MTHFR位點設計的正向引物序列為：AGGACAGTGTGGGAGTTTGG(SEQ?ID?No.7)，反向引物序列為：GAAAAGCTGCGTGATGATGA(SEQ?ID?NO.8)；針對TS位點設計的正向引物序列為：GTGGCTCCTGCGTTTCCCCC??(SEQ?ID?No.9)，反向引物序列為：GGCTCCGAGCCGGCCACAGGCATGGCGCGG(SEQ?ID?NO.10)；針對GSTP1位點設計的正向引物序列為：CTGCTGTGTGGCAGTCTCTC(SEQ?ID?No.11)，反向引物序列為：CCGTTACTTGGCTGGTTGAT(SEQ?ID?NO.12)。

3.如權利要求2所述的引物序列在檢測其相應的基因突變中的應用。

4.如權利要求3所述的應用，其特征在于檢測方法如下：

4.1提取病人腫瘤組織基因組DNA；

4.2以待測腫瘤組織基因組DNA為模板，用權利要求2所述的擴增引物進行PCR擴增；

4.3PCR擴增產物凝膠電泳分析；

4.4PCR擴增產物測序。

5.如權利要求4所述的應用，其特征在于所述步驟(4.2)中PCR反應體系每20μl組成如下：待測病人腫瘤組織基因組DNA?50～100ng，Taq酶0.125μl，上下游引物(10μM)各1μl，dNTP(2.5mM)2μl，10×PCR緩沖液(含Mg²⁺)2μl，余下為無菌蒸餾水。

6.如權利要求4所述的應用，其特征在于所述步驟(4.2)中用于檢測DPYD*2A的PCR擴增反應條件是：95℃預變性2min，隨后95℃變性30sec，57℃退火30sec，72℃延伸30sec，進行40個循環，最后72℃延伸7min，4℃保存。

7.如權利要求4所述的應用，其特征在于所述步驟(4.2)中用于檢測DPYD*5A的PCR擴增反應條件是：95℃預變性2min，隨后95℃變性30sec，57℃退火30sec，72℃延伸30sec，進行40個循環，最后72℃延伸7min，4℃保存。

8.如權利要求4所述的應用，其特征在于所述步驟(4.2)中用于檢測DPYD*9A的PCR擴增反應條件是：95℃預變性2min，隨后95℃變性30sec，57℃退火30sec，72℃延伸30sec，進行40個循環，最后72℃延伸7min，4℃保存。

9.如權利要求4所述的應用，其特征在于所述步驟(4.2)中用于檢測MTHFR的PCR擴增反應條件是：95℃預變性2min，隨后95℃變性30sec，58℃退火30sec，72℃延伸30sec，進行40個循環，最后72℃延伸7min，4℃保存。

10.如權利要求4所述的應用，其特征在于所述步驟(4.2)中用于檢測TS的PCR擴增反應條件是：95℃預變性2min，隨后95℃變性30sec，58℃退火30sec，72℃延伸30sec，進行40個循環，最后72℃延伸7min，4℃保存。

11.如權利要求4所述的應用，其特征在于所述步驟(4.2)中用于檢測GSTP1的PCR擴增反應條件是：95℃預變性2min，隨后95℃變性30sec，55℃退火30sec，72℃延伸1min，進行40個循環，最后72℃延伸7min，4℃保存。

12.如權利要求4所述的應用，其特征在于所述步驟(4)中測序PCR擴增的反應條件為：95℃預變性4min，隨后95℃變性30sec，50℃退火15sec，進行35個循環，最后60℃延伸4min，4℃保存。