[發明專利]一株產殺/抗白蟻化合物的內生菌

無效

• 申請號: 201110261415.0
• 申請日: 2011-09-05
• 公開（公告）號: CN102321555A
• 公開（公告）日: 2012-01-18
• 發明（設計）人: 周東坡;趙凱;平文祥;劉軍
• 申請（專利權）人: 黑龍江大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/125
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標事務所 23109
• 代理人: 何強

技術領域

本發明涉及一株產殺/抗白蟻化合物的內生菌。

背景技術

白蟻Termite屬于節肢動物門昆蟲綱有翅亞綱等翅目的昆蟲，是較為古老的社會性害蟲。每年因白蟻危害建筑物和農作物所造成的經濟損失達千億美元以上。現有的殺滅白蟻的藥劑均為化學藥劑，故都有很大的毒副作用，造成嚴重的環境污染。利用生物技術開發具有高效、無毒、殘效期長、對環境影響小的白蟻生物防治劑成為未來白蟻防治劑的主要方向。

白蟻等昆蟲能消化木材中的木質纖維素，不是它們自身的本領，而是靠其后腸內的微生物的作用。白蟻若喪失了腸道中消化木質素和纖維素的微生物的作用，就會因為不能消化木材而死。研究者已經發現，美國路易斯安納州的Juniperus?virginiana和美國俄勒岡州的Chamaecyparis?lawsoniana具有抗白蟻、抗腐蝕等特性，且從這兩種樹中分離到香榧醇、香柏酮等十多種具有抗白蟻作用的生物活性物質。據推測內生菌的基因可以和其寄生的樹木基因相互傳遞，生活在植物體這一特殊環境中的內生菌能產生與宿主相同或相似的代謝產物，所以推測這類樹的抗白蟻化合物可能由內生菌產生。另外，國外的研究也表明了植物內生菌的代謝產物對防治植物蟲害具有潛在的應用和開發價值，所以從天然抗白蟻植物中篩選出可產生抗白蟻化合物的植物內生菌切實可行。目前，利用樹木內生菌生物發酵合成的代謝產物防治白蟻在國內外尚未見有報道。

發明內容

本發明提供了一株產殺/抗白蟻化合物的內生菌，可以產殺/抗白蟻化合物，增加了能夠發酵生產殺/抗白蟻化合物的微生物的數量，為利用內生菌生物發酵合成的代謝產物防治白蟻奠定了物質基礎。

本發明產殺/抗白蟻化合物的內生菌為枯草芽孢桿菌新亞種HUB-I-47(Bacillus?subtilis?subsp.virginiana?subsp.nov?HUB-I-47)，保藏在中國典型培養物保藏中心(CCTCC)，保藏地址是武漢市武漢大學，保藏日期為2009年7月22日，保藏編號為CCTCC?NO：M?209162；本發明枯草芽孢桿菌新亞種HUB-I-47革蘭氏染色陽性，桿狀，多呈單個存在或呈鏈狀排列，菌體大小為(0.6μm～0.9μm)×(1.4μm～1.7μm)，無莢膜，產芽孢，芽孢橢圓中生，孢囊無明顯膨脹，周生鞭毛，可運動，無伴孢晶體?？莶菅挎邨U菌新亞種HUB-I-47在牛肉膏蛋白胨培養基上菌落呈白色，近圓形，不透明，表面干燥、無光澤，無明顯皺褶狀突起，邊緣不整齊，中心略突出。

本發明枯草芽孢桿菌新亞種HUB-I-47可厭氧生長，具有運動性，過氧化酶試驗呈陽性，V.P試驗呈陽性，吲哚試驗呈陰性，硝酸鹽還原試驗呈陽性，明膠水解試驗呈陽性，酪蛋白水解呈陽性，淀粉水解試驗呈陽性，可利用檸檬酸鹽，不可利用丙酸鹽、尿素，不能水解酪氨酸和精氨酸，能夠分解葡萄糖、木糖、阿拉伯糖和甘露醇產酸?？稍诤?0g/LNaCl、50g/L?NaCl或70g/L?NaCl的培養基中生長，可在含有0.001％(質量)溶解酵素的培養基中生長。

本發明枯草芽孢桿菌新亞種HUB-I-47(Bacillus?subtilis?subsp.virginiana?subsp.novHUB-I-47)通過16S?rDNA序列比對分析，與芽孢桿菌屬(Bacillus)內各種之間有極高的同源性，同源性為99％以上。與參考菌株枯草芽孢桿菌AS1.1098(B.subtilis?AS1.1098)和枯草芽孢桿菌Ki-2-132(B.subtilis?Ki-2-132)相比，本發明枯草芽孢桿菌新亞種HUB-I-47的菌體大小明顯小于參考菌株(參考菌株菌體大小為0.7μm～0.8μm×2.0μm～3.0μm，呈鏈狀排列)，且枯草芽孢桿菌新亞種HUB-I-47在培養過程中不產色素，而參考菌株在培養后期能夠產生色素。本發明枯草芽孢桿菌新亞種HUB-I-47與參考菌株相比生長溫度不同(參考菌株的最低生長溫度為15℃、最高生長溫度為50～55℃，最適生長溫度為37℃)。通過結合菌體形態特征、生長條件、生理生化試驗和分子生物學鑒定結果確定枯草芽孢桿菌新亞種菌株HUB-I-47屬于芽孢桿菌屬(Bacillus)，為枯草芽孢桿菌亞種(Bacillus?subtilis?subsp.virginiana?D.P.Zhou，K.Zhao，J.Liu?et?W.X.Ping，subsp.nov)。

本發明枯草芽孢桿菌新亞種HUB-I-47可在牛肉膏蛋白胨培養基上生長。枯草芽孢桿菌新亞種HUB-I-47的最低生長溫度為12℃、最高生長溫度為47℃，最適生長溫度為31℃。