[發明專利]一種酵母展示型脂肪酶協同超聲波破碎紫菜細胞的方法

無效

• 申請號: 201110260328.3
• 申請日: 2011-09-05
• 公開（公告）號: CN102321596A
• 公開（公告）日: 2012-01-18
• 發明（設計）人: 阮暉;張延;余璐;徐娟;周陳偉;杜姍姍;楊璐;何國慶
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C12N9/20
• 分類號: C12N9/20;C12N9/60;C12N15/81;C07K1/14;C08B37/00;C12P21/06;C12R1/84
• 代理公司: 杭州天勤知識產權代理有限公司 33224
• 代理人: 胡紅娟

1.一種酵母展示型脂肪酶協同超聲波破碎紫菜細胞的方法，包括：

將紫菜干粉、酵母展示型脂肪酶加入水中混勻，于35～37℃下酶解反應30～45min，再于30～32℃下利用功率為730～750W的超聲波破碎65～70min；

所述酵母展示型脂肪酶通過如下方法制備：

將經線性化處理的重組質粒轉入畢赤酵母(Pichia?pastoris)GS115中，將所得轉化子接種于BMMY培養基中，誘導培養72～144h后離心收集菌體，菌體經沖洗和冷凍干燥制得酵母展示型脂肪酶；

所述重組質粒由原始載體pPIC9K和依次插入原始載體pPIC9K中MFα1信號肽基因下游的脂肪酶基因和畢赤酵母GS115的細胞壁α凝集素基因組成。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，以重量份計，水1000份、紫菜干粉20～25份、酵母展示型脂肪酶1～2份。

3.一種提取紫菜多糖或紫菜蛋白的方法，包括：

將紫菜干粉、權利要求1所述的酵母展示型脂肪酶加入水中混勻，于35～37℃下酶解反應30～45min，再于30～32℃下利用功率為730～750W的超聲波破碎65～70min，得細胞破碎液，分離純化得紫菜多糖或紫菜蛋白。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述紫菜多糖或紫菜蛋白的分離純化方法為：將所述細胞破碎液離心后取上清液，鹽析，4℃靜置12h后離心，上清液為紫菜多糖溶液，沉淀為紫菜蛋白。

5.一種制備紫菜降血壓肽的方法，包括：

將紫菜干粉、權利要求1所述的酵母展示型脂肪酶加入水中混勻，于35～37℃下酶解反應30～45min，于30～32℃下利用功率為730～750W的超聲波破碎65～70min，分離純化得紫菜蛋白；將紫菜蛋白、酵母展示型蛋白酶加入水中混勻，于36～37℃下酶解反應130～133min，得紫菜降血壓肽；

所述的酵母展示型蛋白酶通過如下方法制備：

將經線性化處理的重組質粒轉入畢赤酵母(Pichia?pastoris)GS115中，將所得轉化子接種于BMMY培養基中，誘導培養72～144h后離心收集菌體，菌體經沖洗和冷凍干燥制得酵母展示型蛋白酶；

所述重組質粒由原始載體pPIC9K和依次插入原始載體pPIC9K中MFα1信號肽基因下游的蛋白酶基因和畢赤酵母GS115的細胞壁α凝集素基因組成。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，以重量份計，水1000份、紫菜蛋白20～22份、酵母展示型蛋白酶1～1.1份。